蛋白测序仪
蛋白测序仪,蛋白质N端测序是测量蛋白质或多肽一级结构的氨基酸序列应用于生物、化学、医学等领域的结构分析结构预测,药物设计等。
- 中文名
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蛋白质N端测序
- 意 义
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所有的蛋白质合成都起始于N-端
- 分 类
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非质谱技术
- 原 理
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Edman化学降解法
蛋白质N端测序蛋白质N端的意义
几乎所有的蛋白质合成都起始于N-端,蛋白质N-端的序列组成对于蛋白质整体的生物学功能有着巨大的影响力。例如N-端序列影响蛋白质的半衰期,同时关联着蛋白亚细胞器定位等,这些与蛋白的功能和稳定性息息相关,对蛋白进行N-端测序分析,有利于帮助分析蛋白质的高级结构,揭示蛋白质的生物学功能。
蛋白质N端测序测定蛋白质N端序列的方法
目前对蛋白N端测序主要分类两大类,其一为非质谱技术,例如经典的Edman降解法、利用反转录RT-PCR得到对应蛋白的cDNA,再来反推得到蛋白序列;其二为质谱技术。各自都有其使用的长处和制约之处,目前,市面上采用的,依然是基于经典的Edman降解法原理,利用美国ABI公司Procise491蛋白序列测序系统进行蛋白N-端测序。
蛋白质N端测序N端测序的原理
蛋白质和多肽N-端测序技术是以Edman化学降解法为基础的,Edman化学降解,其基本原理是包括通过异硫氰酸苯脂与蛋白质和多肽的N-端残基的偶联,苯氨基硫甲酰酞(PTC-肽)环化裂解,和噻唑呤酮苯氨(ATZ)转化为苯异硫尿氨基酸(PTH-氨基酸)三个主要的化学步骤,每个循环从蛋白质与多肽裂解一个氨基酸残基,同时暴露出新的游离的氨基酸进行下一个Edman降解,最后通过转移的PTH-氨基酸鉴定实现蛋白质序列的测定。