厌氧管
厌氧管是一种厌氧耗材,由玻璃细管,丁基橡胶内塞和外面的盖子组成的,口径大小一致,按长度的不同可以分为: 长度(1)0- 60nm (2)61-120nm (3)121nm以上厌氧管等,具体型号如下:16X60mm厌氧管 , 16X100mm厌氧管,16X160mm厌氧管, 18X180mm厌氧管.另一属性直径可以分为直径16mm厌氧管和直径18mm厌氧管. 厌氧管的盖子会有一个小孔便于实验人员插针使用,建议使用的时候,变换插针的位置,以保证管子的良好的密封性。厌氧管最常用的是16*160。
- 中文名
- 厌氧培养
- 外文名
- anaerobic culture
- 术 语
- 生物
- 微生物
- 厌氧菌
- 特点
- 微生物置于与分子态氧隔绝状态
- 工 艺
- 厌氧培养罐、厌氧袋、厌氧手套箱
厌氧培养分类
由于目的不同而有不同的培养方法,可分为以下几大类:
(1)与空气隔绝或尽量少接触空气的培养法:在三角瓶瓶颈以下装满液体培养基,通过煮沸把溶解的空气赶出后,立即冷却进行细菌接种。由于发酵而产生H2和CO2时,就可进一步确认是厌氧细菌。另外,把琼脂培养基加入普通试管约10厘米高度进行穿刺培养,或移植于液体培养基和固体斜面培养基上以后,再加一层液体石腊或矿物油,用这些方法可防止与空气接触。
(2)除掉空气的方法:把微生物装入耐压容器中进行真空培养,或充满二氧化碳、氢气、氮气、氩气等。这些气体可把事先混入的微量氧气除掉。在氢存在时,可用置换后飞溅火花等方法来除掉残存的氧气
(3)去氧的方法:使用碱性邻苯 三酚(pyrogallol) 、黄磷、金属铬和稀硫酸进行化学除氧,或使用好氧细菌及发芽的种子,使通过呼吸而消耗掉氧气。
(4)在培养基中加入还原剂(如0.1%的巯基乙酸钠盐,0.01%的硫化钠等)。以上各种方法进行适当组合就能进一步确认厌氧细菌。为了确定厌氧性,可在碱性条件下加入葡萄糖并加热,与配制的还原型次甲蓝(美蓝)溶液一起加入,保持脱色状态即可。
厌氧培养培养工艺
厌氧培养微生物厌氧培养
1.可利用厌氧产气袋法进行厌氧培养。
规格2.5L的产气袋只能将2.5L容积内的氧气完全吸收,转化成二氧化碳,同理,3,5L的产气袋能吸收3.5L容积的氧气。微需要产气袋和二氧化碳产气袋亦是如此,为达到相应的氧气浓度和二氧化碳浓度,不仅容积要固定,放置的培养物数量也基本要装满,在出厂前都根据计算设定好了的,所以,培养也需要在设定的条件下进行。
日本三菱的厌氧培养罐有两种规格:2.5L(13.5*19.7*9.5cm,容纳12只9cm标准培养皿),配套使用1只2.5L规格的厌氧产气袋;7.0L(21.3*28.0*11.2cm,容纳42只9cm标准培养皿),配套使用3只2.5L规格的厌氧产气袋或者2只3.5L的厌氧产气袋。两种都是长方体,原厂的产气袋培养后不会产生负压,直接可以打开,所以不需要泄压孔。
2.厌氧袋(Bio-bag)即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。塑料袋透明而不透气,内装气体发生管(有硼氢化钠的碳酸氢钠固体以及5%柠檬酸安瓿)、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。放入已接种好的平板后,尽量挤出袋内空气,然后密封袋口。先折断气体发生管,后折断美兰指示剂管,命名袋内在半小时内造成无气环境。如不突变表示袋内已达厌氧状态,可以孵育。
3.厌氧手套箱(Anaerobie glove box)是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一。它是一个密闭的大型金属箱,箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板,板上装有两个手套,可通过手套在箱内进行操作,故名。箱侧有一交换室,具有内外二门,内门通箱内先关着。欲放物入箱,先打开外门,放入交换室,关上外门进行抽气和换气(H2,CO2,N2)达到厌氧状态,然后手伸入手套把交换室内门打开,将物品移入箱内,关上内门。箱内保持厌氧状态,也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。该箱可调节温度,本身是孵箱或孵箱即附在其内,还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落,这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究,大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。