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Polysciences公司23966-2停产,替代品23966-1,现货,代理商
2017年年初,Polysciences公司就给各代理经销商邮件通知23966-2停产,替代品23966-1
23966-1跟23966-2的唯一区别就是重量不一样,由原来的2g装变成了现在的1g装,但是价格却涨了不少
目前蚂蚁淘现货充足,价格很好
PEI转染手册
转染操作流程:
1、细胞传代:
转染前24h内分离293T细胞至含10%胎牛血清的DMEM培养基 中进行传代培养,接种密度如下:
6孔板:0.5x106细胞
10cm培养皿:4.0x106细胞
15cm培养皿:9.0x106细胞
2、转染
转染前将所有试剂置于室温。
2.1质粒DNA的稀释
在无菌试管中,用无血清的DMEM W / O酚红培养基(浓度为10%)稀释质粒DNA(ug)。病毒包装体(psPAX2):病毒包膜(pMD2G)和重组质粒DNA的稀释比例分别为4:2:1。
6孔板:200ul+3ug的DNA
10cm培养皿:1ml+7-8ug的DNA
15cm培养皿:2ml+11-12ug的DNA
2.2 转染复合体形成
将PEI(1ug/uL)加入已稀释的总DNA中,PEI与DNA(ug)的混合比率为3:1。加入后立即涡旋混合。
6孔板:9ul PEI复合体(1ug/ul)=9ug
10cm培养皿:21ul PEI复合体(1ug/ul)=21ug
15cm培养皿:33ul PEI复合体(1ug/ul)=33ug
将添加到细胞的DNA/ PEI的混合物在室温下孵育15分钟。
4、收获转染细胞
转染后48小时内收获转染细胞/或病毒上清。
试剂的配制:
PEI(1ug/ul) Polysciences(CAT#23966-1配制成储液:)
1、将无内毒素的无菌水加热至80℃左右溶解PEI,冷却到室温。
2、调整pH值至7.0,用0.22um的滤器过滤消毒,分装后储存在-20℃。工作液可保持在4℃