楼主 | 收藏 | 举报 2011-12-13 21:48   浏览:156   回复:4

【求助】细胞免疫荧光染色,蛋白定位异常的问题请教

做中性粒细胞胞浆内一种蛋白的免疫荧光染色,二抗是FITC标记的,用DAPI复染。
用激光共聚焦显微镜观察,原本应该在细胞浆内的绿色荧光出现在细胞核内,胞浆内无目的绿色荧光,与DAPI的定位完全一致。请教这是为什么呢?
步骤如下:
1.分离人外周血中性粒细胞,计数并涂片
2.多聚甲醛固定后曲拉通打孔
3.脱脂奶粉封闭
4.一抗37度1小时,二抗37度1小时
5.DAPI复染10分钟
6.激光共聚焦观察

溶液均为PBS配置
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沙发 | 回复 | 举报 2011-12-14 08:38
请大家帮帮忙啊
藤椅 | 回复 | 举报 2013-01-10 23:02
不知你的问题解决了没?我今天做免疫荧光遇到同样的问题,应该胞浆表达的抗体却是胞核表达。。。。
请问这是为什吗?
板凳 | 回复 | 举报 2014-01-20 14:16
请问您的问题解决了没有,我现在出现了和您一样的情况,求指教!
马扎 | 回复 | 举报 2018-03-16 21:54
你好,请问后来问题解决了吗?我遇到了同样的问题

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