最近忙完实验，忙完文章，发现群里很多战友在问我关于MLST实验及相关数据提交的事情，群里关于这个实验的内容确实不多，现我将我做MLST实验及数据提交的过程与大家分享一下，不足之处希望大家改进。
1、引物设计
我是在PUBMLST网站上找的引物，当然还有其他网站，这和你研究的物种有关系；
2、PCR
我直接采用的网站上的PCR条件，没有修改，其中还是有个别样本PCR结果不符合要求（结果显示两条条带或是条带不亮，暂时没有图片，如有需要，后期可以上传）。这种情况你可以送测序，有的情况是可以测序的。最保险就是重提样本DNA，然后PCR。有时候同一批样本DNA，有个别样本就是有问题，这种情况重提就可以，也就20分钟的时间。
3、测序
测序很花钱，我是双向测序，不过其实MLST管家基因设计基本在800bP以内，测通也可以，不过有钱的情况下建议双向测序，老外要求这样。
测序结果回来，分别将测序结果去掉杂峰，然后双向测序拼接。
拼接的结果在网站上比对，完全匹配，恭喜你，你的实验已经完成。
如果有一个或两个碱基不匹配，这时系统会提示你和某个alle number最接近，这种情况需要重提样本DNA，重PCR然后再次测序比对，如果和上次一样，恭喜你，你发现了一个新的ALLE。一定要重复两次试验。
4、数据提交
在网站上都有编辑的联系方式，建议你在提交数据前先联系编辑，一般他会给你一个模板。还有最重要的一点，千万不要用QQ提交数据，邮件会发不出去，这点我有惨痛及经历，以为编辑退回，结果是邮箱不对。163、sina都可以。
网站上有提交数据的表格，我将我的提交表格以照片形式附在文章最后。
谢谢大家。有问题可以继续交流，邮件我就不一一恢复了，人太多。抱歉。后期我还会分享我做PFGE的惨痛经验，给后来的师弟师妹参考。
2016.12.19
于图书馆
