染色质免疫共沉淀，超声图求帮忙分析。

采用碧云天P2078试剂盒

实验步骤见下截图

做到L步骤时，选用超声机器为功率150W的机器，采用20%的功率，分别超声10s和5s不同次数后，没有做M步骤和N步骤，直接在超声不同次数后取10uL样品，琼脂糖凝胶电泳，结果如下

求教各位园子里的战友，给予一些经验，谢谢

 

In step B, are you sure that for 10 cm dish only 10 ml medium is added? How many cells are there per 10 cm dish?

The gel picture showed that over 70% of total genomic DNA is less than 200 bp. However, I am not sure where those clrosslinked proteins are since you does not perform decrosslink and DNA extraction in step M and N. It seems there is no, if any, effective protein-DNA crosslinked.

老师您好，谢谢您的回复

在步骤B中，说明书要求是10cm dish 使用10mL培养基，在实际情况中，10mL培养基确实可以铺满整个10cm dish的底部。

细胞没有计数，10cm的培养皿，90%的融合率，细胞数经验上大于5×10E6细胞数。

确实做得时候没有吃透原理，没有执行M步骤，以及后面的纯化步骤。以为做完L步可以超声检测一下了。

这样做是因为，第一次摸条件，想多尝试一些超声次数，每超声几次就取10uL的样品。如果做纯化的话，10uL操作不太方便，就直接取样电泳了。下次做的时候，再加入5M NaCl 和纯化DNA探索一下。

楼主您好，我也用了碧云天的试剂盒，可是为什么条带弥散的特别厉害？请问有什么改进的方法吗？

剂盒，可是为什么条带弥散的特别厉害？请问有什么改进的方法吗？