目前芽胞杆菌的敲除方法主要有两种：
1. 传统的基于温敏型的质粒的基因敲除方法，成功率还比较高，和大家分享一篇专利文献
《枯草芽孢杆菌基因组无痕修饰方法》，见附件1
2. 目前新的方法是基于CRISPR-Cas9的敲除方法，和大家分享两篇文章
《Development of a CRISPR-Cas9 Tool Kit for ComprehensiveEngineering of Bacillus subtilis》 见附件2
《Editing of the Bacillus subtilis genome by the CRISPR-Cas9 system》 见附件3
新的方法最主要的还是载体的构建，带cas9基因的质粒往往比较大，转化效率都比较低，cas9基因和sgRNA在一个载体上成功率可能更高，但转化更难，sgRNA有时候效率不一定高，综合算起来，敲除一个基因的时间不一定会比传统方法快。
附件3-Editing of the Bacillus subtilis genome by the CRISPR-Cas9 system .pdf
附件2-Development of a CRISPR-Cas9 Tool Kit for Comprehensive (1).pdf
附件3-Development of a CRISPR-Cas9 Tool Kit for Comprehensive (2).pdf
附件2-Development of a CRISPR-Cas9 Tool Kit for Comprehensive (1).pdf
附件1-枯草芽孢杆菌基因组无痕修饰方法.pdf
