楼主 | 收藏 | 举报 2018-03-16 12:49   浏览:188   回复:1

想请问一下提取的组蛋白Histone3怎么定量啊,用来跑WB内参总是不齐

主要研究H3K4 H3K9 H3K27等等一些组蛋白甲基化的变化情况,跑WB的时候用Histone 3 当内参,但是一直跑不齐。我用的酸提取法提取的Histone,最后用的ddH2O溶解的组蛋白。因为听说BCA试剂盒不能用来测组蛋白H3的浓度而且看ABCAM的protocol说的用Bradford法,所以目前用的Bradford (考马斯亮蓝)法,用的BSA作的标准品方法(自己配的考马斯亮蓝和标准品),595测量的OD值,标准曲线Result 0.97....没有BCA试剂盒做出来的标曲(一般都0.997+)那么好。这样定量出来内参一直跑不齐,想问一下是因为我自配的考马斯亮蓝和BSA标准品有问题?还是这个方法有问题?你们有什么好的总组蛋白H3的定量方法吗?(除了试剂盒就没办法了吗,我看总组蛋白H3的定量试剂盒好像3000+挺贵的。)

万分感谢。

 

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沙发 | 回复 | 举报 2018-03-16 13:12

对条带进行灰度分析 然后根据灰度分析的结果微调上样量。

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