楼主 | 收藏 | 举报 2018-03-07 12:03 浏览:314 回复:13

请教WB

请问大神，这个条带怎么回事儿？

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沙发 | 回复 | 举报 2018-03-07 12:38

抗体不特异或者是本来就有两条带，看位置是否正确

藤椅 | 回复 | 举报 2018-03-07 14:46

条带多是抗体的问题，不一定是错的，但一定是这个的原因。你的图不好看，是操作问题，不均匀。

板凳 | 回复 | 举报 2018-03-08 14:19

楼上正解，推荐一篇wb操作方面的综述吧：

https://www.labome.com/method/Western-Blot-Protocol-Troubleshootings-and-Survey-Results-on-Instruments-and-Reagents.html

马扎 | 回复 | 举报 2018-03-08 15:13

有可能抗体是多克隆抗体，目标蛋白存在亚型，如果分子量是对的，那应该没问题。背景颜色太深封闭的时间应该长一些

地板 | 回复 | 举报 2018-03-09 16:50

封闭时间太短，背景太深了

6楼 | 回复 | 举报 2018-03-09 22:53

mi_cun
封闭时间太短，背景太深了

背景深是什么原因？用软件调整也调整不好

7楼 | 回复 | 举报 2018-03-12 10:47

看着楼主的问题，觉得WB背景很深，一个是抗体封面的问题，可能封闭时间过长洗膜不充分，导致非特异性蛋白的结合。另外，抗体特异性不是很好，条带多，不清楚主带。希望对你有帮助

楼主可把Marker标注清楚，自己的分子量以及实验的条件写明，大家好帮你找问题

8楼 | 回复 | 举报 2018-03-15 21:44

foreverpang
抗体不特异或者是本来就有两条带，看位置是否正确

估计抗体特异性不好，用的Bioworld的抗体，用鼠的细胞还可以，这图是人的细胞，估计特异性不好吧

9楼 | 回复 | 举报 2018-03-15 21:46

rankaikai319
看着楼主的问题，觉得WB背景很深，一个是抗体封面的问题，可能封闭时间过长洗膜不充分，导致非特异性蛋白的结合。另外，抗体特异性不是很好，条带多，不清楚主带。希望对你有帮助
楼主可把Marker标注清楚，自己的分子量以及实验的条件写明，大家好帮你找问题

封闭了2个小时，是不是封闭时间太长了曝光的时候比较难曝，也会导致背景比较深？这个条带都是目标蛋白，没有MARKER

10楼 | 回复 | 举报 2018-03-15 21:46

mi_cun
封闭时间太短，背景太深了

封闭了2个小时...