CNAS CL36中关于试剂比对内容求助...

聊聊我们科室的验证方案，供您参考。

核酸提取率验证：

1、选用试剂盒自带的阳性质控品作为参考品（一般为合成质粒，纯度较高）；

2、准备10只干净的1.5ml EP管，每管分别加入100ul阴性血清和5ul阳性质控品混匀作为待测样本；

3、按试剂盒说明书描述的提取方法进行核酸提取，备用；

4、取24只PCR反应管，A组10管分别直接加入阳性质控品5ul，B组10管分别加入前面提取好的核酸5ul，另外4管为标准品；

5、按试剂盒说明书上的反应条件进行PCR反应；

6、提取效率分析：A、B两组10管定量检测值分别计算出算术平均值（A、B）

核酸提取效率=B*4/A ×100%

核酸扩增效率应该比较简单了，一般荧光定量PCR仪都会自动计算扩增效率的，您只需要关注一下就好了，也可以将自己计算。

对于试剂批间差异和关键耗材抑制物等验证在附录A6里都有说明，按要求操作就可以了。

其实试剂验证还是很麻烦的，也挺浪费的，最好还是跟试剂供应商达成协议：试剂批号不要经常更换，一年之内最好不要超过3个批号。

另外，整个验证过程最好从头开始，提取的核酸冻存起来也是会降解的。毕竟做这些都是为了保证质量，不是单纯为了应付上级检查的。

（仅供参考，希望可以帮到您。。）

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HaiboTao

聊聊我们科室的验证方案，供您参考。

核酸提取率验证：

1、选用试剂盒自带的阳性质控品作为参考品（一般为合成质粒，纯度较高）；

2、准备10只干净的1.5ml EP管，每管分别加入100ul阴性血清和5ul阳性质控品混匀作为待测样本；

3、按试剂盒说明书描述的提取方法进行核酸提取，备用；

4、取24只PCR反应管，A组10管分别直接加入阳性质控品5ul，B组10管分别加入前面提取好的核酸5ul，另外4管为标准品；

5、按试剂盒说明书上的反应条件进行PCR反应；

6、提取效率分析：A、B两组10管定量检测值分别计算出算术平均值（A、B）

核酸提取效率=B*4/A ×100%

核酸扩增效率应该比较简单了，一般荧光定量PCR仪都会自动计算扩增效率的，您只需要关注一下就好了，也可以将自己计算。

对于试剂批间差异和关键耗材抑制物等验证在附录A6里都有说明，按要求操作就可以了。

其实试剂验证还是很麻烦的，也挺浪费的，最好还是跟试剂供应商达成协议：试剂批号不要经常更换，一年之内最好不要超过3个批号。

另外，整个验证过程最好从头开始，提取的核酸冻存起来也是会降解的。毕竟做这些都是为了保证质量，不是单纯为了应付上级检查的。

（仅供参考，希望可以帮到您。。）

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谢谢老师的回复。

从您回复的内容中有几个疑问还需您烦请解答：

1、第2条中，没理解为什么要加入100ul阴性血清？

2、核酸提取效率验证是不是只为了验证核酸提取液的试剂性能，而跟PCR反应试剂和仪器的扩增无关？

3、核酸提取效率的公式没看懂？

提取效率的计算不是应该要知道里面的实际总核酸量吗，然后根据实际提取的核酸量除以实际总核酸量得出核酸提取效率。好比一堆黄金矿石里实际有2斤黄金，方法一从这堆矿石能提取到1斤黄金，则方法一的黄金提取效率=1斤/2斤=50%。方法2从这堆矿石中能提取到2斤，则方法2的黄金提取效率=2斤/2斤=100%。不知道我这个理解是不是有误？

4、试剂批间验证我们使用留样再测方法，我想问一下没有经过核酸提起的样本中的核酸与提取后的核酸比较，那个保存起来更稳定呢？如果提取后的核酸保存更稳定，不确定因素则较没提起核酸的样本更小，使用提取后的核酸来验证试剂的批间差不是更好吗？

说的有点多。烦请解答一下，谢谢。