【求助】双荧光酶报告基因过表达质粒能不能直接用目标转录因子直...

【求助】双荧光酶报告基因过表达质粒能不能直接用目标转录因子直接代替

不妥，转录因子直接进入细胞的效率肯定不如质粒转染效率高，即使成功进入细胞，如果进入比例不高，如何证明转录因子确实已进入了细胞，也是比较难的（用WB法，可能表达不够显著）。

湘雅沂哥
不妥，转录因子直接进入细胞的效率肯定不如质粒转染效率高，即使成功进入细胞，如果进入比例不高，如何证明转录因子确实已进入了细胞，也是比较难的（用WB法，可能表达不够显著）。

谢谢，准备转染细胞是悬浮细胞，担心质粒转染效率，所以才考虑直接用转录因子，细胞是HL-60.

molei123
准备做双荧光酶报告基因，设计了A转录因子过表达质粒，和启动子报告基因，考虑能不能直接用A转录因子蛋白代替A转录因子过表达质粒；这样用报告基因转染细胞再加A转录因子到细胞培养液中培养，这样能不能行得通？

1.蛋白质直接转入细胞的方法前提一般是要把细胞固定和破膜。这只是细胞膜的问题，然后还是这个蛋白质是要入核的，如果是没有体内的天然的翻译加工后过程，人为加转录因子还是很难可以过细胞膜，还要过核膜。而DNA相对来讲，会容易一些。
2.你觉得是有了DNA，然后可以生成很多蛋白质的方法好，还是直接给蛋白质比较好
3.转入双质粒，可以直接说是in vivo下的，转录因子在转录翻译后的蛋白质水平直接调控和识别启动子。