【实验求助】检测凋亡的caspase通路是选择WB还是酶活试...

【实验求助】检测凋亡的caspase通路是选择WB还是酶活试剂盒

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futuo1988
RT，本人打算检测某细胞株的抗凋亡能力，经文献查询应该是内源性细胞凋亡通路，所以我打算检测一下caspase 9, caspase 3/7, 以及cleaved PARP
现在问题来了，文献中有的人是砸的western，有的是用的caspase酶活试剂盒（caspase 9/3/7 activity kit），我现在不知道应该选择哪种方式了......western嘛就是实验条件比较成熟，但是涉及一大堆什么total caspase, cleaved caspase之类的东东；酶活试剂盒没用过，可能得慢慢摸条件....就价格来讲，两种方法花费差不多
请教各位做信号通路的大神，给我点建议吧，谢谢！

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显然自己买抗体做
apoptosis cst有卖一套抗体的
你也可以选择total cleaved都能检测的抗体
都很好用的尤其是PARP1

shylook
显然自己买抗体做
apoptosis cst有卖一套抗体的
你也可以选择total cleaved都能检测的抗体
都很好用的尤其是PARP1

谢谢！我的小老板意思也是砸WB比较好....再追问一个小问题哈，如果检测两个细胞株的抗凋亡能力不同，通过检测caspase9 caspase 3和PARP可以足够说明问题了吗？另外在比较的过程中是仅仅比较cleaved后的caspase呢，还是total. cleaved都要做上去？

futuo1988
谢谢！我的小老板意思也是砸WB比较好....再追问一个小问题哈，如果检测两个细胞株的抗凋亡能力不同，通过检测caspase9 caspase 3和PARP可以足够说明问题了吗？另外在比较的过程中是仅仅比较cleaved后的caspase呢，还是total. cleaved都要做上去？

首先 作为凋亡指标 totalcleaved 都要做另外有抗体两个都识别 就用一个抗体不能的 就得买total和cleaved两个
比较凋亡能力 首先cleaved caspase&PARP1 是要做的，有可能一定程度上可以反应差别（主要是cleaved的多少）；但有时单靠这个可能做不出区别，因为每个细胞对凋亡的敏感性不一样,也就是说，有时即使cleaved casps多了，细胞也没有凋亡或者比较弱。
真正比较简单能比较两株细胞凋亡差异的是做流式，因为它能检测出凋亡细胞占总细胞的比例。