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2024-12-22 19:37
实时荧光定量PCR用什么试剂盒比较好呢:
我荧光定量试剂盒有很多种,其实是用这些样品仪器试剂材料都是大同小异~不过最大的区别在于后期耗材的专用性~这个是非常值得考虑的,不要理那些推销员说的,还是要结合你的工作, 是用现成试剂盒还是自己开发?标本量多大?检测对象是已知还是未知的? 上面的确定后,再来看要值得注意的地方: 比如说实验中耗材最烧钱的,逆转录试剂盒里面逆转录酶量少用的最快,一旦用完就要买新的试剂盒。SybGreen每个副孔要5ul,每个基因要3副孔(为了检测重复性),每个标本要设置内参基因,所以如果你做一个目的基因,每个标本就有6个副孔,跑一次荧光PCR要30ul,做两个的话就有9个副孔,跑一次要45ul。通常有用SYBR Green Mix做的,但是这里建议你用EvaGreen做,灵敏度和平行性都要好于SYBR Green,并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。荧光PC讲究操作精细,所以刚开始你做的标本几乎就是练手,结果误差(CP Error)会很大,肯定要重跑,有些跑个3、4次也是有的哦。 |