【求助】竞争法ELISA的标准曲线...

【求助】竞争法ELISA的标准曲线

大多数国产试剂盒生产厂家会提供对数坐标纸，可直接手工绘制曲线；如果酶标仪带有分析软件，可由软件直接拟合曲线，并自动计算出样本的浓度值；老式的酶标仪只能打印出OD值，需要实验员自己绘制曲线并计算，下面介绍2种绘制竞争法曲线的方法，希望对大家有帮助：
一、在对数坐标纸上手工绘制曲线（Log-logit双对数标准曲线）
1. 实验做双孔，实验结果如下表所示。
标准点浓度OD1OD2OD均结合率
S002.2262.1922.209 　
S10.11.7251.6791.702 77.0%
S20.41.3131.3381.3255 60.0%
S31.60.9070.8340.8705 39.4%
S46.40.5170.5170.517 23.4%
S525.60.2300.2440.237 10.7%
2）各标准点吸光值取均值。在表中OD均一列。
3）将S1~S5的OD均值与S0的OD均相除，为标准点的百分结合率。
4）在log-logit坐标纸上绘图。
5）坐标纸上横轴从左至右第一个1-9表示为第一个10进位，第二个1-9表示为第二个10进位。第三个1-9表示为第三个10进位。也就是说，如果第一个1代表1ng/ml，则第二个1代表10ng/ml，第三个1代表100ng/ml。因为本次实验标准曲线范围是从0.1ng/ml到25.6ng/ml，则可以用第一个1代表0.1ng/ml，第二个1代表1ng/ml，第三个1代表10ng/ml。
6）坐标纸纵轴为百分比。即各标准吸光值的百分结合率。
7）曲线第一个数值点是（0.1，77.0%）。则在横轴左起点的1处向上至70~80之间，由70向上7个小格处。
8）曲线第二个数值点是（0.4，60.0%）。则在横轴左起第一个4，向上至60的位置。
9）曲线第三个数值点是（1.6，39.4%）。则在横轴左起第二个1至2之间，由第二个1向右6个小格。再向上至30~40之间，由30向上9个半小格处。
10）曲线第四个数值点是（6.4，23.4%）。则在横轴左起第二个6至7之间，这里6与7之间分为5小格，则每个小格是0.2。所以由第二个6向右2个小格。再向上至20~30之间，由20向上约3个半小格处。
11）曲线第四个数值点是（25.6，10.7%）。则在横轴左起第三个2至3之间，这里2与3之间分为10小格，则每个小格是1。所以由第三个2向右5个半小格。再向上至10~20之间，由10向上约半小格处。
12)画一条通过各点的直线。要求尽可能多的点在线上，同时剩余的点均匀分布在直线的两边。
13）样品也同样由吸光值计算百分结合率，再从纵轴上的相应结合率找到直线上的点，此点对应的横坐标浓度即为样品的浓度。无须换算。

第二种方法是用ELISA拟合软件绘制曲线并计算样本值，推荐一个软件ELISAcalc，界面小巧，使用也很简单，丁香园一些战友也有推荐，下面附上这个软件的使用方法。

ELISACalc.rar(266.96k)

我这有个软件，个人觉得挺好用的
http://www.91files.com/?PK3IU3EHFKDAK3LAUDP2

再就是个人觉得竞争法最好样品浓度越靠近最低浓度越好，若是接近最大浓度，误差率太高，吸光度值稍微变化，浓度变化更大，有时同一吸光度值可能有不同的浓度出现。