南京金益柏elisa试剂盒操作步骤如何？...

南京金益柏elisa试剂盒操作步骤如何？

ELISA试剂盒操作步骤：关于elisa试剂盒的具体操作步骤：
　　1．取出试剂盒室温平衡30min，取出血样放至室温。
　　2．配标准品：取150uL标准品加入150uL标准品稀释液稀释，依次稀释5次。
　　3．加样：分别于各反应孔中加入标准品50uL，样品40UL，标准品做复孔，样品做3孔。
　　4．分别于样品孔中加入10UL抗体。
　　5．标准品和样品孔中分别加入50uL链酶亲和素-HRP，盖上封板膜,轻轻震荡混匀，37℃温育60min。
　　6．配洗涤液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
　　7．洗涤：小心揭开封板膜，弃去液体，甩干，每孔加200uL洗涤液，静置30s后弃去，如此重复5次，拍干。
　　8．显色：每孔先加入显色剂A 50uL，再加显色剂B 50uL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色6min。
　　9． 终止：每孔加入终止液50uL，终止反应（此时蓝色立即转为黄色）。
　　10．测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度。测定应在加终止液10min之内进行。
　　11．保存结果，收拾桌面。
　　12．分析处理数据
　　注意事项
　　1. 取出板条前恢复到室温后再打开外包装袋，实验中不用的板条立即放回包装中，密闭封口，其余不用试剂应盖好。
　　2. 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
　　3．实验板孔加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应孔的孵育时间一致。
　　4．洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。
　　5．试剂盒内试剂请在保质期内使用，不同批号试剂不要混用。
　　6．1000pg/ml以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。大于1000pg/ml 的样品应以标准稀释缓冲液稀释后重做。在结果分析时，结合考虑相应的稀释度。

楼主应该根据条件选择ELISA试剂盒。
　　ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。由于ELISA试剂盒里的试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。
　　由于ELISA试剂盒种类繁多，下面小编就教大家如何根据条件选择合适的试剂盒：
　　（1） 固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。
　　（2） 包被抗体（或抗原）的选择：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，小鼠ELISA试剂盒时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。
　　（3） 酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记抗体部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法"（包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度）在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
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