【求购】测纤溶活性试剂...

【求购】测纤溶活性试剂

人尿激酶（uPA）ELISA试剂盒
产品编号：DS1001-1
度生公司组织翻译，仅供参考
【介绍】
尿激酶型纤溶酶原激活化剂（uPA）是一种有较高特异性的丝氨酸蛋白酶。它能使纤溶酶原转变成活化的纤溶酶。较宽范围的丝氨酸蛋白酶能降解大多数细胞外介质的主要蛋白质成分。uPA先与其受体结合，接着成为外周细胞蛋白水解的中间体，此发生在许多过程中包括细胞转移，血管生成中组织再生、动脉粥样化的形成，肿瘤细胞的转移和排卵过程。若uPA水平很高，则标志着攻击性乳房癌、攻击性前列腺癌，膀胱癌和胃癌等愈后很差。
【原理】
本试剂盒是用来测定人体血浆、组织和细胞培养液上清液中的uPA含量。本试剂盒测试原理是夹心的酶联免疫分析法，全过程需3.5小时，酶标板孔中先包被有特异性uPA的鼠单克隆抗体，此抗体与标准和样品中的uPA结合，再与生物素化的多克隆抗体结合成夹心的复合物。生物素化的多克隆抗体可用链霉亲和素---过氧化酶进行检测。洗去未结合的物质，加入过氧化酶底物显色，经终止后，测定显色的强度。
【警示和注意】
此试剂盒仅用于科学研究
超过有效期的试剂盒不能使用
终止液是酸溶液
【试剂盒组成】
uPA微孔板：96孔聚苯乙烯板，12×8包被有uPA的单克隆抗体
封板胶带，每盒含有预先割好的封板条，可适用不同数量板条的化验。
uPA标准：溶于含蛋白的缓冲液中（40ng，冻干品）
生物素化的uPA抗体（100×），生物素化的兔抗人uPA的多克隆抗体（80ul）
链霉亲和素---过氧化酶结合物（SP酶标物）：200倍浓缩（60ul）
10倍浓缩EIA的稀释液：10倍浓缩的含蛋白缓冲液（20ml）
浓洗涤液（10倍）：10倍浓缩的含表面活性剂的缓冲液（2×30ml）
显色底物：备用（8 ml）四甲基联苯胺
终止液：0.5N盐酸（12ml）终止显色反应
【储存】
未打开的试剂盒应于2-8℃保存可至有效期
打开过的试剂可于2-8℃保存一个月，复溶后的标准液可于-20℃或更低温度保存
打开未使用过的条板可放回到箔袋中，封好，在真空干燥器中可保存一个月
【其他需要的材料】
带有450nm波长的读板仪
吸液枪（1—20ul、20—200ul，多孔道吸液枪）
去离子或重蒸馏的试剂级纯水
【样品采集和储存】
►血浆：用1/10体积的枸橼酸钠凝剂采血，于2000xg离心10分钟，分离血浆。用EIA稀释液以1/10稀释样品，余下的血浆可于-20℃或更低温度下储存，避免重复冻融。
►细胞培养液上清液：于2000xg离心10分钟除去残渣。取上清液化验，样品可于-20℃或更低温度下储存，避免重复冻融
►组织：可用含0.5%Triton X—100的50mM的Tris缓冲盐溶液提取组织样品。于14000xg离心30分钟，取上清液测定蛋白浓度。用EIA稀释液稀释组织提取液。剩余的提取液于-20℃或更低温度下储存。
【试剂制备】
应使用新鲜制备的试剂，在用前应让试剂回到室温。若溶液有结晶，可轻摇使结晶完全溶解。
标准曲线：用4ml酶免缓冲液稀释40ng uPA标准，其浓度为10ng/ml作储备液。让此液放置10分钟，用前轻轻混匀。用酶免缓冲液以1:5稀释此标准储备液，得浓度为2ng/ml，再用酶免缓冲液对此液进行倍比稀释得到浓度为1，0.5，0.25，0.125和0.0625ng/ml的标准溶液。EIA缓冲液可作为“0”标准管。（0ng/ml）。
※具体稀释见原文P3表
EIA浓稀释液（10倍）：用试剂级水以1:10稀释此浓溶液
生物素化的uPA抗体（100倍）：轻轻旋转此抗体并根据所需的量，用酶免稀释液以1:100稀释后备用
洗涤浓溶液（10倍）用试剂级水以1:10稀释此浓溶液。
SP酶标物（200倍）轻轻旋转该瓶试剂，根据所需量用EIA稀释液以1:200稀释后备用。
【操作步骤】
按要求制备试剂及标准系列，用前让所有试剂回到室温，化验是在室温进行（20-30℃）。
把剩余的板条立即放回箔袋中，并封好口，避免和水蒸气接触，放在真空干燥器里储存。
每孔加50ul标准液或样品，盖板，孵育2小时，从加好最后一孔计时。
用200ul洗涤液洗板五次，每次洗板后应把板倒过来放于纸巾上拍干。
每孔加50ul生物素化的uPA抗体，并孵育30分钟
用200ul洗涤液按上述洗板五次
每孔加50ul链霉亲和素---过氧化酶标记物。孵育30分钟，调好酶标仪，并设置好参数。
用200ul洗涤液按上洗板5次。
每孔加50ul底物，并且孵育20分钟，直至出现较合适强度的兰色，轻轻敲板，并用吸管尖破掉气泡。
每孔加50ul终止液，颜色由兰色转成黄色。
立即在450nm读板。请注意在加完终止液约10分钟后高浓度的点会出现一些不稳定的黑色颗粒，它会降低读数。
【数据分析】
计算每个标准浓度和样品的三复样的平均值。
画出标准曲线：横坐标上画出标准点浓度。在纵坐标上画出其相应的吸光度。若是双对数作图，则经回归分析后有较好的线性。
从标准曲线上获得未知样浓度，乘以各样品的稀释因子。
【标准曲线】
见原文P4。该曲线作演示用，每次化验均应制作自己的标准曲线。
【方法特性】
uPA的最低检出限﹤50pg/ml
批内变异系数cv为4.8%，批间为6.4%
本化验能检测单链uPA、双链uPA及与受体，PAI的结合物。还未观察到明显的交义反应及干扰。

lijun200206
从哪里可以买到测纤溶活性的试剂，如纤溶酶原，尿激酶，纤维蛋白原及凝血酶？急！

gaoyuan8426 wrote:
各位大虾好，请问国内哪里可以购买到绿色荧光蛋白基因。多谢。

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mark:ELISA基础知识

好东东,顶一下

总结的很全面，讲解很详细。谢谢楼主，顶起！

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