【辩论】TNF-a是抗肝纤维化还是促肝纤维化[精华]...

【辩论】TNF-a是抗肝纤维化还是促肝纤维化[精华]

反方:TNF-a主要表现为促肝纤维化
TNF-α可促进纤维母细胞及肝内HSC增殖并促进HSC向肌成纤维细胞转化.需要指出的是TNF-α对胶原合成作用的研究结果有相互矛盾的,需进一步研究.汪涛等采用双抗夹心法检测219例各类肝病患者血清中TNF-α水平,发现所有慢性肝病患者TNF-α含量显著高于正常人[汪涛.临床肝胆病杂志,1995;11(1):40-41]。有实验证明TNF-α还可增加TGF-β1刺激ECM的合成作用,将分离的大鼠Ito细胞分别加入TGF-β1与TNF-α,二者均能促进Ito细胞转化为MFb,且明显增加FN,PG等ECM成份的产生,用TNF-α5nmol/L处理Ito细胞24小时后胶原含量增加3倍以上[WeinerFR,ShahA,Biempicaletal.Matrix,1992;12(1):36],说明TNF-α在肝纤维化形成过程中起重要作用。
近来发现，核转录因子NF-kB在HSC的激活中起着重要作用. NF-kB位于ICAM-1基因的启动子内，是由p50和p65构成的二聚体复合物，为DNA结合蛋白. 在正常情况下，NF-kB与抑制因子IkB结合形成三聚体复合物存在于细胞质内，处于无活性状态. 多种细胞外刺激信号能够诱导NF-kB进入细胞核而被活化. 目前研究表明，NF-kB参与调节免疫反应及炎症过程，促进前炎症因子(IL-1，TNF-a，IL-6)、趋化因子(IL-8，巨噬细胞炎症蛋白-1)等炎性基因及TGF-b基因的转录，而这些细胞因子在肝纤维化发生发展中起重要作用. 他们可引起中性粒细胞及巨噬细胞活化，增强中性粒细胞及单核细胞向损伤的肝实质浸润，刺激成纤维细胞增生等. 因此，TNF-a、IL-1与NF-kB之间造成细胞因子网络中的恶性循环. 而TNF-a、IL-1作为细胞外刺激信号，又可激活NF-kB，进一步放大炎症反应]. 因此，TNFa、IL-1与NF-kB之间造成细胞因子网络中的恶性循环.
TNF-α作为一种重要的肝脏炎症介质是肯定的, TNF-α对肝纤维化形成的作用可能是间接的,是通过刺激肝脏炎症而发挥促纤维化作用.
(!!!!!现在的网怎么了,有时写好的东东发了却要重新登陆,结果原来的写好的东东没了,又要重写,真是打击积极性!!!!!!)

反方:TNF-a主要表现为促肝纤维化

近年认为，肝纤维化是肝脏受外界损伤刺激引起免疫反应，导致一系列体液因子和多种细胞﹑细胞外基质间相互作用的结果。细胞因子对其发生起着重要的介质作用。已知TNFα能刺激体外的肝星状细胞等的胶原合成，加速转化生长因子对肝星状细胞向肌成纤维细胞转化，促进其糖胺多糖、纤维连接素等基质的合成。有实验报道在小鼠肝纤维化形成过程中，其纤维化程度的加重伴有TNFα-mRNA水平的升高。这些实验结果均提示，TNFα可能参与肝纤维化的病理过程。但有实验显示，TNFα能刺激培养的成纤维细胞胶原酶的合成，从而促进胶原蛋白的降解。因此TNFα对肝纤维化可能具有双重作用。但大多实验认为TNFα对肝纤维化而言，以促进为主。

反方：肿瘤坏死因子-α既有促进肝纤维化的进程的作用，又有抗纤维化的作用。但以前者为主。
平时对这方面的了解很浅,仅知道TNFα可以激活肝HSC,但没有深入.感染老谭主任给了这次学习的机会,查了些文献,得出上述观点

下面把部分查到的部分东西列一下：
高楠，王芳。TNFα导致肝星状细胞激活的观察。河南大学学报（医学科学版）2004 Vol.23 No.2
【摘要】 目的:通过电镜观察,探讨TNFα和肝星状细胞激活的关系.方法:采用体外培养大鼠HSC,将细胞分为对照组和TNFα组,收集细胞制作电镜标本,在透射电镜下观察HSC的形态学的改变.结果:电镜下见TNFα组细胞体积增大,可见粗面内质网数量明显增多,线粒体、内质网呈轻度扩张,呈明显激活样改变.结论:TNFα对HSC有增殖激活的作用.

王爱民　张莉　陈淑娥等，白细胞介素-1β及肿瘤坏死因子-α对大鼠肝星状细胞c-fos基因表达的调节作用。中华实验外科杂志。2004 Vol.21 No.7
【摘要】 目的探讨白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对大鼠肝星状细胞c-fos基因表达的影响.方法在培养的肝星状细胞系中加入IL-1β(1μg/L)、TNF-α(30 μg/L),于8、24、48、72 h 4个时间点收集细胞,提取总RNA;用逆转录定量多聚酶链反应(PCR)方法测定c-fos的基因表达水平.结果 IL-1β组肝星状细胞c-fos基因表达水平在8、24、48 h 3个时间点均明显高于对照组;8 h最高,为对照组的4倍.TNF-α组肝星状细胞c-fos的基因表达水平在8、24、48、72 h均明显高于对照组;8 h高,为对照组的3倍.结论 IL-1β、TNF-α可增强肝星状细胞c-fos基因的表达.

孙永年　龚守军　徐斌。肝硬化患者血清TNF-α、IL-6检测的临床意义，武警医学2002 Vol.13 No.12
【摘要】 目的 探讨慢性乙肝患者血清肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白细胞介素-6(Interleukine-6，IL-6)、白细胞介素-8(Ntereukine-8，IL-8)的临床价值。方法 对146例乙肝患者采用ELISA法测定血清TNF-α、IL-6、IL-8的水平；同时对其血清透明质酸(Hyaline acid，HA)、Ⅲ型前胶原(Type Ⅲ Procollagen，PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Type Ⅳ collagen，C-Ⅳ)水平亦进行同步测定；并对68例行肝穿刺。结果 慢性乙型肝炎轻度、中度、重度及肝硬化患者血清TNF-α、IL-6、IL-8水平均不同程度高于对照组(P＜0.01)，随着肝损害程度的加重逐渐升高；并与肝损害程度及肝纤维化(HA、PCⅢ、C-Ⅳ)水平呈正相关关系(P＜0.01)。血清TNF-α、IL-6、IL-8水平同血清胆红素(Total biliribin)、谷丙转氨酶(ALT)亦呈正相关。结论 慢性乙型肝炎患者血清TNF-α、IL-6、IL-8水平与肝纤维化程度及肝功能损害发生发展密切相关；并能反映肝脏疾病的严重程度。

另外，赵东强 张晓岚 姜慧卿写的一篇《TNF-α与肝星状细胞》的综述讲的也不错。内容概要如下：
1TNF-α对HSC与ECM合成的影响
1.1 HSC活性 用TNF-α直接干预原代培养的HSC，研究其对HSC增殖与激活的影响. 应用3H-胸苷标记法对肝星状细胞增殖的研究结果发现，TNF-α对HSC的增殖起抑制作用，对以表达平滑肌肌动蛋白(SMA)与TGF-β1受体为标志的HSC的“激活”则起诱导作用［21,22］. TNF-α对激活的HSC的增殖与凋亡均起抑制作用. 激活的HSC受TNF-α作用后，其自然凋亡率下降了28%±2%(P＜0.05). 同时，TNF-α能显著减少激活的HSC的CD95L表达，而CD95的表达未改变. 受TNF-α作用后，CD95激动抗体诱导的HSC凋亡率也显著下降，由96%±2%降至58%±2%(P＜0.01)，提示TNF-α激活了细胞内的抗凋亡机制. 培养的HSC经过激活，表现为G0/G1 期细胞的比例减少，而G2期细胞的比例明显增高，这种增高在经TNF-α作用后能显著 被抑制. 在慢性肝损伤鼠的肝切面上，用结蛋白与CD95L作为激活的HSC的标志，结果大部分HSC不显示凋亡信号. 这些发现显示，TNF-α对体外培养并激活的HSC的增殖与凋亡均起抑制作用，并且这两方面的作用似乎彼此相互联系，可能是慢性肝损伤时激活的HSC寿命延长的内在机制.
1.2 合成ECM 肝纤维化是由于ECM的合成和降解失衡 造成的. ECM的主要成分包括胶原蛋白、非胶原性糖蛋白与蛋白多糖三类. 在慢性肝损伤 时，三类成分均有不同程度的增多，其中以胶原成分的变化最为明显，尤其是Ⅰ型胶原的合成增多并大量沉积对肝纤维化的形成起着重要作用［23-25］. TNF-α能够通过与细胞表面受体结合，激活细胞内的信号传导机制，从而抑制培养的成纤维细胞的胶原基因表达. Hern-ndez-Mu-oz et al［26］在应用TNF-α作用 于培养的HSC后，分别测定了基础状态、抑制或激活G蛋白以及其他主要的细胞内信号传导通 路时Ⅰ型胶原-mRNA的表达水平，结果显示：基础状态下TNF-α能显著降低Ⅰ型胶原-mRNA的表达，而百日咳毒素（G蛋白抑制剂）则能抑制TNF-α的此种作用；通过阻断腺苷酸环化酶、蛋白激酶、磷脂酶A2、磷脂酶C1、钙通道及钙调蛋白等均不能降低TNF-α对Ⅰ型胶原-mRNA的抑制作用；与此相反，C2-神经酰胺和鞘磷脂激酶与TNF-α一样能抑制胶原基因的表达，但TNF-α并不增强鞘磷脂激酶的作用. 以上结果表明，TNF-α对HSC的Ⅰ型胶原基因表达起抑制作用，而且此作用可能是通过G蛋白介导并以鞘磷脂与神经酰胺作为细胞内信号传导通路而实现的. Houglum et al［27］用中国仓鼠卵巢细胞或其分泌的TNF-α接种裸鼠的方法，研究了血清中缓慢升高的TNF-α对肝脏胶原代谢的影响. 经TNF-α作用后的鼠肝内的胶原合成与胶原基因表达，在鼠质量下降前便受到抑制. 在转基因鼠，经过8h后，TNF-α便抑制了肝Ⅰ型胶原-hGH转基因 的表达，其中包括第一内含子与5′端-440bp. 从这些转基因动物分离、培养的HSC，其-440bp的Ⅰ型胶原-hGH表达也同样被TNF-α抑制，而且此作用与HSC是 否激活无关. 对HSC进行转染分析显示，对TNF-α更具有特征性反应的片段是5′端的-220bp. 由此可见，TNF-α是通过组织特异性调节区而抑制肝Ⅰ型胶原基因表达的. ?TNF-α除抑制HSC的Ⅰ型胶原表达外，也能降低其Ⅲ型胶原的表达，但对HSC合成纤维连接 蛋白（FN）与腱蛋白（TN）却起促进作用.
1.3 基质金属蛋白酶 在肝内主要参与ECM降解的一 组基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases, MMPs）系，其特异性抑制剂（tissue inhibitor of metalloproteinases, TIMPs）对该酶系的活性产生抑制作用. 肝内MMPs与TIMPs主要来源于HSC，二者与ECM的降解密切相关，在肝纤维化进程中发挥着重要作用［28-33］. TNF-α对HSC表达MMPs与TIMPs均有刺激作用，而TGF-β只诱导TIMPs的表达. 在肝损伤的早期阶段，伴随着炎症与坏死， TNF-α的产生明显增多，基质的降解主要是TNF-α作用于HSC后MMPs合成增多所引起的；而在肝损伤的慢性持续阶段，基质降解减少的主要原因是TGF-β诱导TIMPs产生增多与MMPs的抑制所致［34］ .

2TNF-α对细胞分子的影响
2.1 粘附分子 粘附分子是存在于细胞表面的一类具有复杂功 能的糖蛋白，能够介导细胞之间的相互粘附，参与众多的生理、病理过程. 近年的研究发现 ，肝脏疾病的发生、发展与粘附分子的表达有关，抗粘附治疗可以减轻肝损伤. 目前已发现的粘附分子主要分五类：免疫球蛋白超家族、整合素家族、选择素家族、Cadherin家族及其他未分类的粘附分子. 其中研究最多的是免疫球蛋白超家族，包括细胞间粘附分子（intercellular adhesion molecule, ICAM-1，2，3）、血管细胞粘附分子-1（vascular cell adhesion molecule-1, VCAM-1）、血小板内皮细胞粘附分子-1（platelet endothelial cell adhesion molecule-1, PECAM-1）以及神经细胞粘附分子（neural cell adhesion molecule, NCAM）等. 研究发现：静息的HSC不表达ICAM-1，而在HSC被激活后，ICAM-1基因及其产物均增加，并且ICAM-1能够趋化炎症细胞，促使炎症细胞从肝 血窦直接浸润到肝实质［35］. 这表明ICAM-1的表达与HSC的活化有关，并在肝纤维化的形成中起着重要作用. VCAM-1也能促进中性粒细胞、单核细胞及T细胞浸入肝实质，与肝脏炎症的发生、发展有密切关系.ICAM-1与VCAM-1的表达可见于 体外培养的HSC与正常的肝窦区及窦周细胞， TNF-α能够诱导HSC的ICAM-1与VCAM-1特异性转录提高几倍以上.
2.2 NF-κB活性 细胞核因子κB（nuclear factorkappa B, NF-κB）是近年来研究最为广泛的转录调控因子，具有多种转录调节活性. NF-κB几乎存在于机体所有的细胞中，但与其他的转录激活因子不同，NF-κB存在于 胞质中且活化后必须移位至细胞核方能发挥其转录激活作用. 在肝脏的肝细胞、内皮细胞 与HSC中都可以检测到NF-κB的活性，许多研究表明其在肝脏炎性损伤、再生和凋亡等方面均有重要作用. NF-κB 是由多肽链p50和p65二个亚基组成的二聚体，包括p50同源二聚体、p65同源二聚体，其中p50-p65异源二聚体发挥生理作用. 无活性的NF-κB在胞质中与其抑制蛋白I-κB形成复合物，当被来源于细胞外的信号所激活时，NF-κB与I-κB分离，NF-κB转位至细胞核，与目的基因的κB结合序列结合后发挥转录激活作用.TNF-α可通过增加NF-κB 复合体（p50/p50和p50/p65）的DNA结合活性而抑制活化的HSC增殖. 人类HSC能结构性表达环氧化酶cox-1与cox-2，其中cox-2体现基本的cox活性. TNF-α能诱导HSC的cox-2mRNA表达与cox活性的提高，而cox-2的激活为NF-κB活化所必需，也是NF-κB抑制HSC增殖的必要条件［36］. NF-κB能够抑制HSC的 Ⅰ型胶原基因转录. Rippe et al［37］用NF-κB p50, p65表达质粒与Ⅰ型胶 原基因表达质粒短暂转染HSC，结果HSC中Ⅰ型胶原基因启动子的转录明显受到抑制. 其量效曲线则显示NF-κB p65是Ⅰ型胶原基因表达的强效抑制剂（最大抑制效果为90%）. 可见，前述TNF-α对HSC的Ⅰ型胶原表达的抑制作用，可能与其增强NF-κB的活性有关.?
总之，在肝纤维化形成机制中，TNF-α对HSC的影响是多方面的，而且也是非常复杂的. 其中不仅有促进肝纤维化形成的一方面，如抑制HSC凋亡、延长HSC寿命和促进HSC释放细胞粘附分子等；另外也有抑制肝纤维化形成的一方面，如抑制HSC的增殖、抑制胶原 合成和促进HSC释放MMPs等.