收藏  |   举报 2011-09-08 10:45   关注:290   回答:3

【求助】【【【【新手求助】】】】请问各位站友,我的逆转录试剂...

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【求助】【【【【新手求助】】】】请问各位站友,我的逆转录试剂盒室温下放了6个小时还能用吗?
举报 2011-09-18 10:18
呵呵,淡定啊!没事的。
RT逆转录试剂盒放在零下20度的原因是:防止反转录酶失活。
为什么酶在室温下失活呢?是温度让它失活吗,答案是否定的,因为酶在42度下作用都有活性,所以在室温下不会失活的。之所以放在零下20度的真正原因是防止反转录酶等各种酶染上杂菌,杂菌产生蛋白酶分解酶,从而让酶失活。因此我们是试剂盒通常都冷冻贮存。
你偶尔一次放在室温,应该没大问题,不要再犯就好!
以后做的时候,把反转录酶和PCR聚合酶放在冰柜里,用的时候从里面加,用完即放回。其他的试剂也应分装。
举报 2011-09-08 19:20

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hyhyyl
呵呵,淡定啊!没事的。
RT逆转录试剂盒放在零下20度的原因是:防止反转录酶失活。
为什么酶在室温下失活呢?是温度让它失活吗,答案是否定的,因为酶在42度下作用都有活性,所以在室温下不会失活的。之所以放在零下20度的真正原因是防止反转录酶等各种酶染上杂菌,杂菌产生蛋白酶分解酶,从而让酶失活。因此我们是试剂盒通常都冷冻贮存。
你偶尔一次放在室温,应该没大问题,不要再犯就好!
以后做的时候,把反转录酶和PCR聚合酶放在冰柜里,用的时候从里面加,用完即放回。其他的试剂也应分装。

......

太感谢了,因为我这个试剂盒还没拆封,应该不会污染吧,一定接受这次的教训,以后要分装好,用完及时放回,希望看到此贴的新手&菜鸟们也要注意啦!谢谢楼上
举报 2011-09-14 17:15
事实证明,是可以用的,我把逆转录酶的量提高了一倍,最后跑荧光定量PCR结果还是很好的,证明之前逆转录是没问题的!
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