【求助】做HBV DNA荧光定量PCR的内参怎么设计啊？...

【求助】做HBV DNA荧光定量PCR的内参怎么设计啊？

HBV DNA 定量检测现在需要内参的吗?
中国国家生物制品检定所都没说要内参啊.
我也是做HBV DNA定量 和 基因分型的,请多联系

你好，我看的外国文献上有做内参的，也有不用的，我的老师说要用，这样实验结果更可靠，我也不知道该怎么办了，而且不知道怎么设计？你的实验结果怎么样啊？我还没开始做，不会的东西还要多向你请教啊，呵呵

可以不用的,加内参一般是为了证明试验过程中试剂没有问题,提取样本没有问题.与相对定量的内参是不同的.具体是加入一种探针和模板,不干扰HBV的探针工作.

呵呵，谢谢高手指点!

临床上做HBV DNA测定的方式如下：（目前国内用的比较常见的达安和匹基的HBV检测试剂盒的检测方式，基本都是采用SYBR Green染料法）
1.标准品。一般试剂盒会提供4个梯度的标准品，一般是5*10e7~5*10e4，每轮实验每个浓度各做1管；
2.对照品。试剂盒中会提供阳性对照，阴性对照和临界阳性对照品，其中每轮实验阴性对照做2管，其他两种对照各做1管；
3.质控品。非试剂盒要求，但一般临床实验室每轮实验都要加1管质控品，用来检控实验室是否污染，实验是否可信；
4.待测样品。每轮实验除了上述的3种之外，省下的孔位就可以放置待测样品了，多多益善了。
临床上一般到不用内参，上面就是临床检测的流程，供你参考了。

HBV的内参IC是将探针结合位置置换的单链DNA，大约900bp左右。可以通过设计引物定点突变再连接克隆制成。此IC在提取环节就加入样本中，全程监控实验的成败。

可以设计呀，主要看你是什么机器，ABI的比较好做，有不明白的联系我。

展开引用

huixu
临床上做HBV DNA测定的方式如下：（目前国内用的比较常见的达安和匹基的HBV检测试剂盒的检测方式，基本都是采用SYBR Green染料法）
1.标准品。一般试剂盒会提供4个梯度的标准品，一般是5*10e7~5*10e4，每轮实验每个浓度各做1管；
2.对照品。试剂盒中会提供阳性对照，阴性对照和临界阳性对照品，其中每轮实验阴性对照做2管，其他两种对照各做1管；
3.质控品。非试剂盒要求，但一般临床实验室每轮实验都要加1管质控品，用来检控实验室是否污染，实验是否可信；
4.待测样品。每轮实验除了上述的3种之外，省下的孔位就可以放置待测样品了，多多益善了。
临床上一般到不用内参，上面就是临床检测的流程，供你参考了。

......

更正一下，huixu后面说的很正确 ，这里指出一点，达安和匹基的试剂盒都是采用taqman探针法做的 ，这一技术比较成熟，临床检测试剂盒多采用这种方法。

检测某种细菌或病毒的含量即常说的绝对定量和检测基因表达量差异即常说的相对定量使用的内参是不一样的，至少在目的上是不一样的。前者使用的内参往往是为了监控所使用的检测体系是否存在问题以及验证检测结果是否可信，如果你自信你的检测体系没有问题，则可以不使用这种内参；而后者使用的内参是为了均一化mRNA提取、反转录效率等因素导致的偏差，二者不可混为一谈。

各位大侠，我们实验室也在准备做HBV的定量检测，但我室和其它公司同一个标本平行检测，比人家的低了一个数量级，请问怎么解释啊？怎么对PCR试剂做效能检测，就是如楼上所说的标曲加阴性，阳性对照吗？