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2013-09-29 06:47
horizon801 wrote:
经战友同意，将交流内容贴出 你好，请问关于稳定细胞株所用载体问题： 1、现在GS载体是否具有比DHFR有优势，相关专利大约什么时候到期？ GS相对DHFR而言具有以下几点优势： 1，细胞株筛选时间短，不需要不断的加压筛选。 2，在细胞株稳定性问题上，GS系统要更加稳定，一般稳定性培养都要做到3个月左右时间。 GS的专利好像还没有到期，DHFR的专利到期了。现在的筛选系统趋向于GS和DHFR双筛选系统，目的是集合两种优点，但效果还不确定。 2、稳定细胞株在使用过程中的产量衰减问题是如何解决的，用大量的稳定细胞株长期加压筛选？ 细胞株克隆不稳定主要是克隆选择不好或筛选系统不好，主要偏向于前者。细胞株稳定性一般培养到两个月以后降低15%左右还是可以接受的 3、如果采用定点整合载体，如何选择？ 这种方法目前常规用的可能比较少，在这方面没有经验的。一般GS或DHFR系统筛选到高表达细胞株克隆的概率是5%左右. |
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2013-09-26 07:44
horizon801 ...... 1、可以出国读博士，毕业先到美国小的生物公司先做做2、国内做培养、发酵研发可以去公司的研发机构，大型反应器如果您不是女汉子，就别去。 3、生物制药目前缺的是那种国际化的、有工作能力的年轻人，提高表达量、提高纯化收率、等给公司带来明确效益的，还有分析方法开发的人员比较抢手。 4、去合资和外企，对于研发来讲比较好，如果你是一个事业型的女孩子，如果你满足于生活的悠闲，可以去研究所，据我所知，研究所往往没有生产型企业的研发搞的更实用，往往偏理论 5、小企业或者是发展中的企业可以学习到很多，国外大企业也好，钱多，范围窄，适合没有太多追求的女孩子 |
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2013-10-02 12:27
心朗朗呵呵，看的次数多少和细胞养的好坏没有必然联系的 所以做管理的不要从看发酵罐的次数来做判断，看的次数多少和你的管理工作没有关系，可以随他去 细胞养得好不好才是你该关心的事情，养得不好可以说，可以提，但是不能从看多少次发酵罐来入手 |
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2013-09-28 04:30
1、关于乳酸的控制控制有哪些比较好的策略，根据以往的经验就是就是降低糖浓度，结果是有的时候管用有的时候不管用，对于下面的工艺开发就比较头疼了。
2、能否推荐一下关于反应器及工艺优化方面的介绍书籍，增加自己对这方面认识。 再次谢谢您 |
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2013-09-23 18:15
1.我个人的经验的，反应器产量有了过程参数的精确控制（pH/DO/temp），流加方案的优化，关键代谢指标的控制（糖、乳酸、谷氨酰胺、氨），应该有较大幅度的提高（30%），当然这个是case by case的，不能一概而论，更多的依赖于细胞株潜力和平台化的培养工艺开发效率。
2、培养基优化的常规方法与思路（参考《用于重组抗体生产的细胞大规模培养工艺开发》） 3、不仅大豆水解物，还有小麦水解物，酵母水解物，肯定是要淘汰的。这些添加物本身成分不明确，质量不可控。培养基的发展方向是CD，即化学成分明晰。 4、目前国内新上项目应该在2g/L左右。 如果不考虑具体的品种，市场容量对产能的要求。个人感觉4g/L没有必要。 重组抗体的产业化工艺开发不仅是细胞培养这一个环节。TITER过高对于下游的压力。对于产品质量的影响，都应该考虑。 版主zhulikou431留言: 加分鼓励。 |
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2013-09-27 08:48
1）控制乳酸，
首先应考虑葡糖糖的限制性流加策略，即根据细胞的葡萄糖消耗速率进行培养基流加。考虑到葡萄糖浓度控制过低（<1g/L）时，培养基中其他营养成分可能消耗殆尽，一般残糖的控制水平可以控制在2-5g/L左右。 目前商品化的培养基及流加策略，都有可供参考的protocal，可以直接在此基础上进行工艺优化。 文献中报道的乳酸阈值（影响细胞生长、抗体质量的乳酸浓度）58mM，l流加培养操作模式下，一般很少能达到。 其次，细胞培养工艺中pH的控制，对乳酸的生成也有影响。一般情况下，pH控制高，即偏碱的环境是刺激细胞产酸的。所以一般表达重组蛋白的培养工艺中，生产期的pH要控制的偏酸性。 最后，溶氧不足也会造成细胞无氧呼吸，代谢产酸的。 至于报道的使用半乳糖替代葡萄糖，不做推荐。 2） 细胞培养的参考书籍 推荐hu weishou 《Cell Culture Technology for Pharmaceutical and Cell-Based Therapies》google可以查到免费电子版本。 |
已解决
