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新手一枚,想知道怎么养好胚胎干细胞...

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新手一枚,想知道怎么养好胚胎干细胞
举报 2017-08-30 09:24

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实验先呆

第一次养胚胎干细胞,复苏的时候复苏到六孔板中的其中一个孔中,结果发现细胞很多,于是换了两个6cm皿养,结果越养越少。很纳闷。请教了几位蚂蚁淘的前辈们,于是乎有几个问题还是在心中,希望还能在这里能得到答复。

1。培养细胞的时候是一定要在六孔板中吗?那一般复苏细胞的时候复苏到几个孔中呢?

2.细胞的密度是大概多少呢?

3.我用的基质胶,说明书上是1;80,结果在孵箱放了一小时后,发现没有想象的胶凝固的样子,没有像果冻那样。反而还是液体状的,这是能用还是不能用呢?

4.如果基质胶一开始就铺好,等到传代的时候再铺,中间每天都在换液,不容易污染吗?

5。刚复苏的细胞,一直漂浮在培养液里,是慢慢地细胞才会贴在基质胶上么,然后才会慢慢在基质胶上生长么?

......


举报 2017-09-07 11:10
我养的是间充质干细胞,不知道对你有没有用。细胞培养不一定是要在孔板里面,用什么东西去培养是取决于自己要求。细胞一般是两小时就可以贴壁了,贴壁后就开始生长,还要确认分离培养的是不是自己所需要的干细胞。如果越传代越少的话可以考虑原因:1. 缺少生长因子,生长条件不合适。 2.是否染菌。3.细胞密度是不是太低了导致其生长不起来,因为干细胞有细胞密度的要求。
举报 2017-09-09 01:10

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绿野仙山
我养的是间充质干细胞,不知道对你有没有用。细胞培养不一定是要在孔板里面,用什么东西去培养是取决于自己要求。细胞一般是两小时就可以贴壁了,贴壁后就开始生长,还要确认分离培养的是不是自己所需要的干细胞。如果越传代越少的话可以考虑原因:1. 缺少生长因子,生长条件不合适。 2.是否染菌。3.细胞密度是不是太低了导致其生长不起来,因为干细胞有细胞密度的要求。

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您好,咨询一下您,您在进行间充质干细胞传代时,铺板密度大概是多少?

举报 2017-09-10 11:56
如果我用的是58的平皿长满,就按照1:5的比例传代
举报 2017-09-08 17:27

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绿野仙山
我养的是间充质干细胞,不知道对你有没有用。细胞培养不一定是要在孔板里面,用什么东西去培养是取决于自己要求。细胞一般是两小时就可以贴壁了,贴壁后就开始生长,还要确认分离培养的是不是自己所需要的干细胞。如果越传代越少的话可以考虑原因:1. 缺少生长因子,生长条件不合适。 2.是否染菌。3.细胞密度是不是太低了导致其生长不起来,因为干细胞有细胞密度的要求。

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间充质干细胞是不是也要用基质胶先包被呢?加到皿里的基质胶在两个小时之后是不是就变成果冻状的了?我的基质胶加进去,两小时以后还是液体状,加进去多少,还能吸出多少,这个胶是起作用了没?
举报 2017-09-10 09:58

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绿野仙山
我养的是间充质干细胞,不知道对你有没有用。细胞培养不一定是要在孔板里面,用什么东西去培养是取决于自己要求。细胞一般是两小时就可以贴壁了,贴壁后就开始生长,还要确认分离培养的是不是自己所需要的干细胞。如果越传代越少的话可以考虑原因:1. 缺少生长因子,生长条件不合适。 2.是否染菌。3.细胞密度是不是太低了导致其生长不起来,因为干细胞有细胞密度的要求。

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干细胞的密度要求大概是多少呢
举报 2017-09-02 04:15
实验先呆

间充质干细胞是不是也要用基质胶先包被呢?加到皿里的基质胶在两个小时之后是不是就变成果冻状的了?我的基质胶加进去,两小时以后还是液体状,加进去多少,还能吸出多少,这个胶是起作用了没?

我不是等到它长好了才放到另一个皿的,是在复苏的第二天就换皿了。一开始我以为干细胞在培养液里悬浮生长,贴壁到基质胶上的细胞是分化的细胞,结果我每天都换基质胶,每天都要把细胞导入一个新的皿里,细胞就越来越少了?请问,前辈我的做法和想法有什么错误?
举报 2017-09-02 10:36
你的要确定这个干细胞类型在这个培养基里面是悬浮的还是贴壁的。我还有一种情况就是分离干细胞的时候,需要两种细胞,在同一种培养里面一个贴壁,一个悬浮。过夜后收集上清离心,把悬浮的细胞收集后换成另外一种培养基它是贴壁的
举报 2017-08-30 21:39
然后贴壁的那个干细胞做分化鉴定来确定它就是自己想要的细胞
举报 2017-09-04 08:38
你的意思就是说干细胞有的是贴壁的,有的是悬浮培养的,先要确定是哪种的?我的是人体胚胎干细胞
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