哪位前辈可以上传一下C57小鼠骨髓间充质干细胞的具体培养步骤...

哪位前辈可以上传一下C57小鼠骨髓间充质干细胞的具体培养步骤

主要有几个问题想问：1，c57小鼠的周龄选多少合适2，冲洗骨髓腔用的是什么？用多少冲？充多少次？我看有人用Pbs，有人用培养基，有人用专门的液冲？不知哪种好3，全骨髓培养法：用离心吗？4，培养基的配方5，长成百分之多少消化6，消化液的配方，消化时间，步骤？7，传到几代就比较纯了希望哪个高手指点一下，谢谢

1.我们用的6-8周的小鼠2.用完全培养基冲就可以3.冲完以后不要离心，拿注射器吹散均匀后就可以

guan9107
1.我们用的6-8周的小鼠2.用完全培养基冲就可以3.冲完以后不要离心，拿注射器吹散均匀后就可以

谢谢你的指导，请问你们养小鼠骨髓间充质干细胞用的是专门养干细胞的培养基，还是自己配的呢？我这几天看文献，用什么的都有，不知道准备买什么还？
还有就是细胞消化时用加EDTA吗？消化时间多少？
你们的细胞好养吗？我看园子里都说不好养，还没完全开始，就有点信心不足了

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dxy_whlyd493

谢谢你的指导，请问你们养小鼠骨髓间充质干细胞用的是专门养干细胞的培养基，还是自己配的呢？我这几天看文献，用什么的都有，不知道准备买什么还？
还有就是细胞消化时用加EDTA吗？消化时间多少？
你们的细胞好养吗？我看园子里都说不好养，还没完全开始，就有点信心不足了

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没用专门的培养基，就是自己配的α培养基加10%sigma 的FBS加1%双抗。用0.25%的胰酶消化，消化3分钟，原代可能不好消化下来，就用细胞刮轻轻刮下来。可能是因为有个经验很丰富的师兄一直带着的原因，我感觉没什么特别难养的

guan9107

没用专门的培养基，就是自己配的α培养基加10%sigma 的FBS加1%双抗。用0.25%的胰酶消化，消化3分钟，原代可能不好消化下来，就用细胞刮轻轻刮下来。可能是因为有个经验很丰富的师兄一直带着的原因，我感觉没什么特别难养的

非常感谢

dxy_whlyd493

非常感谢

还想问您一下，首次换液的时间是多少比较合适呢？还有细胞接种密度多少合适？冻存液，用百分之10的FBS 百分之10的DMSO 百分之八十的DMEM可以吗

dxy_whlyd493

还想问您一下，首次换液的时间是多少比较合适呢？还有细胞接种密度多少合适？冻存液，用百分之10的FBS 百分之10的DMSO 百分之八十的DMEM可以吗

我们一般是四天的时候半换液，7天全换。冻存液我们一般是按dmso：血清:培养基1:2:7的比例配。接种密度的话我们是按一只小鼠的两条腿接种一个大的培养瓶

guan9107

我们一般是四天的时候半换液，7天全换。冻存液我们一般是按dmso：血清:培养基1:2:7的比例配。接种密度的话我们是按一只小鼠的两条腿接种一个大的培养瓶

谢谢你能这么仔细的给我讲解，真的真的特别感谢。