关于稳转细胞株培养出现的问题...

Ucell
这两个细胞总的来说是很好培养的，考虑到试剂也是细胞来源处提供的，收到细胞状态也没问题，那问题基本就是操作不过关了，这个只能靠多练习多思考。

同时也在养着好几株细胞，有hela和hepg2，没有做稳转的，养着都没有问题，状态很好。

在培养稳转的这几株细胞的时候，比平时操作还要注意，但是还是出现问题了。

我想问下，除了操作问题之外，还可能有哪些问题呢？

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大悦nju

同时也在养着好几株细胞，有hela和hepg2，没有做稳转的，养着都没有问题，状态很好。

在培养稳转的这几株细胞的时候，比平时操作还要注意，但是还是出现问题了。

我想问下，除了操作问题之外，还可能有哪些问题呢？

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Ucell

如果同时培养的野生型细胞没有问题，那可能是稳转株干扰或者过表达的基因对细胞生长有一定影响，这种情况建议你联系你委托构建的单位，问问他们培养过程中有没什么特别要注意的地方。

好的。谢谢大神。

我一直怀疑是两处培养条件有差别，导致细胞培养出现问题，委托单位说他们那边细胞培养状态很好，但是一到我们这边培养就出现问题。

另外就是昨晚我37℃细胞消化3min后少部分脱壁，大部分仍贴壁，延长消化时间1min后，又室温放置消化1min左右，基本脱壁后加入培养基终止消化的，我想问下，有可能是消化这步影响的么？我们这边同时培养的野生型细胞消化时间在2-3min，委托单位那边说构建的稳转株他们的消化时间是2-3min。

谢谢大神指教！

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大悦nju

好的。谢谢大神。

我一直怀疑是两处培养条件有差别，导致细胞培养出现问题，委托单位说他们那边细胞培养状态很好，但是一到我们这边培养就出现问题。

另外就是昨晚我37℃细胞消化3min后少部分脱壁，大部分仍贴壁，延长消化时间1min后，又室温放置消化1min左右，基本脱壁后加入培养基终止消化的，我想问下，有可能是消化这步影响的么？我们这边同时培养的野生型细胞消化时间在2-3min，委托单位那边说构建的稳转株他们的消化时间是2-3min。

谢谢大神指教！

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消化时间不宜过长，过长会影响生长状态

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大悦nju

好的。谢谢大神。

我一直怀疑是两处培养条件有差别，导致细胞培养出现问题，委托单位说他们那边细胞培养状态很好，但是一到我们这边培养就出现问题。

另外就是昨晚我37℃细胞消化3min后少部分脱壁，大部分仍贴壁，延长消化时间1min后，又室温放置消化1min左右，基本脱壁后加入培养基终止消化的，我想问下，有可能是消化这步影响的么？我们这边同时培养的野生型细胞消化时间在2-3min，委托单位那边说构建的稳转株他们的消化时间是2-3min。

谢谢大神指教！

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Ucell

这两株细胞的野生型我这边养的时候消化时间也在2min左右，你的稳转株消化近5min不太正常，如果委托单位也是2-3min，那消化这步肯定哪有问题，贴壁细胞的消化对细胞状态影响是很大的。

好的，谢谢大神！

胰酶覆盖完细胞后吸掉，不然消化完细胞后离心丢掉上清

胰酶，胰酶的原因吧

稳转株本来就是筛选出的单克隆，状态与野生型细胞比状态是脆弱一些。刚拿回来的时候尽量不要去消化，培养瓶里原带的培养基可以收集起来，每次换液先用原来带的培养基。细胞在培养箱里适应2-3天。随后传代消化时候尽量不要时间过长，不要等细胞浮起来时候再终止消化。还有终止消化的时候吹打细胞不要过于用力，轻轻吹打即可。终止的血清和胰酶一定要离心，离心！将胰酶去掉，不然很影响细胞状态。供参考