稳转细胞株的筛选...

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稳转细胞株的筛选

举报 2016-01-23 13:45

质粒转染后质粒会有某种抗性，直接相应的抗生素筛选即可

举报 2016-01-18 13:43

yizhe2011
质粒转染后质粒会有某种抗性，直接相应的抗生素筛选即可

谢谢回复
可能我没说清楚，我是lipo3000转染，G418筛选，G418筛选浓度已摸索出
但是在筛选过程中阴性细胞会掺杂，我想知道大家都是怎么筛选的，具体的有限稀释法又是怎么做的？
谢谢！

举报 2016-01-21 00:19

你细胞数少一点，成单个的克隆，然后挑选单克隆细胞扩大培养你，这样就纯了

举报 2016-01-16 11:51

yizhe2011
你细胞数少一点，成单个的克隆，然后挑选单克隆细胞扩大培养你，这样就纯了

谢谢您的回复，扩大培养的话，您一般怎么做，会不会细胞长不起来？

举报 2016-01-19 09:46

l小呆
谢谢您的回复，扩大培养的话，您一般怎么做，会不会细胞长不起来？

就是时间的问题，张久一点可以的

举报 2016-01-17 09:45

不如直接用慢病毒转。。。转上去的几乎都是稳定株。。。普通的质粒转染，整合效率极低，并且筛选周期超级长。。。等单克隆长出来都差不多1个多月了

举报 2016-01-15 17:21

kangaroo0513
不如直接用慢病毒转。。。转上去的几乎都是稳定株。。。普通的质粒转染，整合效率极低，并且筛选周期超级长。。。等单克隆长出来都差不多1个多月了

谢谢您的回复，慢病毒暂时没条件做，只能脂质体转染。

举报 2016-01-26 06:04

l小呆

谢谢您的回复，慢病毒暂时没条件做，只能脂质体转染。

那就用piggybac转座子系统，通过脂质体稳转。。这个做稳转株效率比直接转染高得多的多的多。

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