抑制素的试剂运用...

抑制素的试剂运用

1.洗液：在100ml浓缩洗液中加入900ml去离子水稀释。室温密封情况下可保存1个月。
2.微孔板：选择实验所需的板条数。剩余不用的部分随同干燥剂密封放回原袋。 1.包被有抗抑制素bB亚单位抗体的微孔板（Anti-InhibinB-CoatedMicrotitrationStrips）：96孔，2-8ºC下密封保存。
2.标准品A/样本稀释液（InhibinBStandardA/SampleDiluent）：2ml×1瓶，胎牛血清，含0pg/mL二聚体抑制素B。使用前2-8ºC下保存。打开后2-8ºC下可保存2周。于-20ºC可长期保存。
3.标准品B-G（InhibinBStandardsB-G）：1ml×6瓶，胎牛血清，含二聚体抑制素B的浓度为10,30,100,250,500,1000pg/mL。使用前2-8ºC下保存。打开后2-8ºC下可保存2周。于-20ºC可长期保存。
4.质控（InhibinBControls）：1ml×2瓶，浓度I、II，胎牛血清，含低浓度和高浓度的抑制素A二聚体。使用前2-8ºC下保存。打开后2-8ºC下可保存2周。于-20ºC可长期保存。
5.样本稀释液A（InhibinBSampleBufferA）：10ml×1瓶，2-8ºC下保存。
6.样本稀释液B（InhibinBSampleBufferB）：10ml×1瓶，2-8ºC下保存。
7.抗体-生物素结合物（InhibinBAntibody-BiotinConjugate）（即用型）：10ml×1瓶，含生物素标记的抗抑制素a亚单位抗体。2-8ºC下保存。
8.酶结合物（浓缩）（Streptavidin-EnzymeConjugate）（即用型）：10ml×1瓶，含链霉和素-辣根过氧化物酶结合物。2-8ºC下保存。
9.TMB底物溶液（TMBChromogenSolution）：15ml×1瓶，2-8ºC下保存。
10.终止液（StoppingSolution）：15ml×1瓶，为0.2M的硫酸。2-8ºC下保存。
11.浓缩洗液（WashConcentrate）：100ml×1瓶，2-8ºC下保存。 操作前所有试剂都应平衡至室温(~25ºC)并充分混匀。标准品、质控及待测样本需同时做双份。
1.取出实验所需板条，并记录各孔位置。
2.在对应的孔中加入标准品、质控及待测样本各50ul。
3.每孔加入25ul样本稀释液A。
4.每孔加入25ul样本稀释液B。
5.封板，以300-400rpm速度震荡，室温下过夜（14-18小时）。
6.洗板3次，在吸水纸上拍干。
7.每孔加入50ul抗体-生物素结合物。
8.封板，以500-700rpm速度震荡，室温下孵育1.5小时。
9.洗板6次，在吸水纸上拍干。
10.每孔加入50ul链霉和素-辣根过氧化物酶结合物。
11.封板，以500-700rpm速度震荡，室温下孵育20分钟。
12.洗板6次，洗完最后一次以后，将洗液在孔内停留15分钟再除去。在吸水纸上拍干。
13.在每孔中加入100ulTMB底物溶液。
14.以500-700rpm速度震荡，室温下避光孵育15-30分钟。
15.每孔加入100ul终止液。
16.30分钟内在450nm处读数。
注：必须以零标准作空白。如果能做到双波长测定，可在600或620nm处读数，将600（620）nm吸收值从450nm处减去，这样可以减少光学误差。 使用血清样本，静脉穿刺术采集血液。样本于2-8ºC可保存24小时，-20ºC或以下可保存30天。避免反复冻融样本。不应采用溶血或脂血的样本。冰冻的样本在实验前应解冻，并充分混匀。向左转|向右转