有没有高手来指导一下c57乳鼠心肌细胞分离培养。...

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这两天实验需要分离乳鼠心肌细胞，操作了两次，但是效果都不好。细胞不贴壁，大量漂浮死亡。我是新手，也没有人指导，只能自己查文献摸索条件，想跟各位老师请教一下，争取早点培养成功。
大概步骤如下：c57小鼠大概六七只，酒精浸泡后不处死取出，迅速打开胸腔取出心脏放入冰PBS冲洗。待心脏取出完毕，冲洗移入有PBS青霉素小瓶中用眼科剪剪成较小组织块。
之后加入0.1％胰酶消化（之前浓度为0.25％，活细胞数量更少。）吹打1min.放入孵箱中3min.弃去上清，加入∥型胶原酶（0.1％）吹打10Min，放入孵箱15Min。取出后加入1ml胰酶。吹打1Min后加入含血清F12培养液终止消化，800转离心5Min。之后取沉淀重悬种板。90Min差速贴壁法纯化心肌细胞。
48h后只有少量（个位数）细胞贴壁，呈三角形。

第一次用0.25％胰酶时离心后有大量鼻涕样物质。
第二次胰酶浓度减小后没有，但细胞沉淀少，且为半透明微白。是不是离心时间不够。
感觉细胞整体状态都不好，几次都没有大量心肌细胞，更不用说观察到心肌细胞搏动。
老师们能不能帮忙分析一下是哪里的原因呢。
有没有比较稳定的小鼠乳鼠心肌细胞分离步骤呢。
希望大神快点出现。

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没有人来吗

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楼主现在进行到哪步了？

请问楼主每只老鼠能提多少细胞

胰酶消化时间太短。