【求助】求小鼠睾丸支持细胞分离经验...

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【求助】求小鼠睾丸支持细胞分离经验

hxy0022

举报 2013-08-31 02:43

今天培养48小时，终于看到贴壁的了，只不过数量少，也算是有点欣慰了。

zlh514559404

举报 2013-08-29 07:52

我也打算做支持细胞、、用买的细胞株做怎样、、会不会对实验结果有影响、、、求大虾指点啊、、

hxy0022

举报 2013-08-21 13:58

我是自己分的呢，买的就不需要鉴定了，后续实验有待跟进

毒理zyt

举报 2013-08-25 05:33

我也在做这个实验，有许多想请教的，我的qq352514121,希望各位大师能够帮我一下，谢了
版主cheff0412留言:
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lilian3719

举报 2013-08-27 12:08

消化时间有点长了，观察消化时有细线状的曲精细管游离出来，再过五分钟就差不多了。我觉得最多30分钟，我一般20几分钟，也许支持细胞少，但损伤小，容易存活贴壁。希望有用。

ziqixiaoying

举报 2013-08-28 06:09

展开引用

hxy0022
各位前辈，我现在要分离小鼠睾丸支持细胞进行培养，但是做了三次都没有贴壁，不知道问题出在哪，**指导！！！
我的步骤：
1、16－22天小鼠颈椎脱臼法处死后，75%酒精浸泡30秒消毒，睾丸取出后置预冷PBS，40分钟（路上所需时间）后开始处理。
2、剔除白膜，剪碎睾丸。0.25%胰酶（含edta）1.5ml/个睾丸37°C消化30-50分钟，等体积DMEM/F12含10%FBS终止消化，1000r/MIN离心5分钟，弃上液。
3、加0.1%胶原酶消化30分钟，过200目网筛，1000r/MIN离心5分钟，弃上液。
4、DMEM/F12含10%FBS 5ml重悬后转如培养瓶，入孵育箱37°C 5%CO2培养。
请教各位，我到底是哪里有问题，是胰酶消化的时间长了吗？

......

请问你后来原代SC细胞做的怎样？我最近做了大鼠Sertoli的分离，第一代长的很好，传代后贴壁性变差，少量贴壁的培养5天也未见增殖，可否帮忙分析下原因，顺便看下细胞形态（第一张图为原代细胞，第二张为第二代生长2d的形态）是否正确。多谢