求助，细胞转染后功能实验的设计问题！...

展开引用

粉爱天晴

我刚开始做转染，悬浮细胞，分别做过表达和敲减，看了很多文献，大都没有提及转染后是用转染的这同一批细胞同时做pcr，wb，cck8，凋亡，细胞周期；还是说这次转染只做pcr或wb，再转染一次做cck8或细胞周期。剩下的功能试验均同前，转染一次做一次？我养的是悬浮细胞，转染后做cck8这些功能试验前需要离心换液吗？跪谢解答！

......

小猪笑笑917115

我认为应该是同时处理的细胞，同时做相应的实验，可信度比较高

理论上好像是应该这样，但是转染后细胞的数量达不到做这些功能实验的数量

粉爱天晴

理论上好像是应该这样，但是转染后细胞的数量达不到做这些功能实验的数量

为什么不做稳转

shylook

为什么不做稳转

我的质粒是PEX，问了厂家可以做瞬转也可以做稳转，但是不知道怎么做，新手~各种查阅啊

粉爱天晴

我的质粒是PEX，问了厂家可以做瞬转也可以做稳转，但是不知道怎么做，新手~各种查阅啊

载体全称？

shylook

载体全称？

pEX-4

pEX-4（pGCMV/MCS/T2A/EGFP/Neo）？只能瞬转吧

shylook

pEX-4（pGCMV/MCS/T2A/EGFP/Neo）？只能瞬转吧

是的，稳转要g418筛，很慢~

大神我想请问一下，如果瞬转的话，是不是转一次做一次cck8，转一次做一次pcr这样子？不断转染然后一个一个做功能试验?不可以转染一次后，就用这批转染后细胞做全部的功能试验吗~

当然可以 不过要wb验证

所以最好筛到stable

shylook

当然可以 不过要wb验证

所以最好筛到stable

问了一下师兄师姐，他们说做稳转需要筛很长时间，我们用的是白血病细胞株，悬浮细胞