细胞转染，有许多孔的细胞死了，什么原因？...

qingwudarao

heck293细胞，铺完板后，一共七块24孔板。发现有两块板的其中两个孔变黄，然后用脂质体试剂转染质粒（质粒浓度1600ng/ul）后细胞，溶液没有变黄。（一般正常情况下都会变黄）没变黄的孔里的细胞都没了。。。什么原因呢

lxc1005

我也在弄这个，293的种可不可以分享一管？或者卖我一管

我遇到了和你一样的情况，也是24孔板，不过我的是C3H10细胞系，感染了病毒的孔细胞慢慢的由中间像周围扩散死掉了，空白组长得好好的，培养基没有变色，没有染菌。现在你的问题解决了吗，求分享！

⑴ 第一天按实验需要将细胞铺板（比如24孔板）。细胞数以第2天密度约50%为宜。37℃ 培养过夜。

⑵ 准备DNA-培养基- Polybrene混合液（具体加入方法与慢病毒转染相同）。

⑶ 去除培养基，在细胞中加入DNA-培养基-Polybrene溶液，在37°C孵育细胞6-20h。

⑷ 去除DNA-培养基-Polybrene溶液。用DMSO shock solution（15%DMSO in 1X HBSS）轻轻盖住细胞（60mm培养皿3ml，100mm培养皿4ml）。每次加入溶液时用手轻晃培养盘10s，使得液体均匀分布。然后37°C孵育细胞4min。

⑸ 立即去除DMSO shock solution，用完全生长培养基轻轻清洗细胞2次。对于60mm培养皿每次用5ml培养液清洗，100mm培养皿每次用10ml培养液清洗。

⑹ 加入完全培养基到细胞中，根据需要进行后续实验。

详情情可以去http://www.hanbio.net/cn/products/item/12094看看

hulalahulala

我遇到了和你一样的情况，也是24孔板，不过我的是C3H10细胞系，感染了病毒的孔细胞慢慢的由中间像周围扩散死掉了，空白组长得好好的，培养基没有变色，没有染菌。现在你的问题解决了吗，求分享！

我也是的！C3H10转染了慢病毒，以前都是好的，最近复苏了两支做实验都是由中心向四周翻卷起来，我是成骨矿化诱导的，矿化到3、4天就会出现。尝试过铺0.1%明胶的两板12孔对照没有铺的就没卷起来，但是按道理不应该这样，以前诱导28天都没问题！！

请问是确定凋亡么？我以为是细胞增殖要快的原因。