收藏  |   举报 2017-05-02 22:12   关注:212   回答:11

细胞转染几天后就死亡,是什么原因?...

已解决 悬赏分:0 - 解决时间 2024-11-12 06:06
细胞转染几天后就死亡,是什么原因?
举报 2017-05-06 16:53

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duocaihui

我转的是7901、7901/DDP两种细胞,前者7901细胞很容易就转上,并且转后,状态良好,可是7901/DDP一转就死,我用的是吉玛慢病毒,转24小时后换液,刚开始一两天,没有异常,但后来细胞慢慢就死了,并且不是漂浮的,很多是贴着壁死,像是瓦解了一样


这是未转时细胞的样子





这是细胞转后,死亡的样子


并且即使是有些细胞未死,细胞后来也变得很脏,感觉有很破碎的细胞碎片

本人实验小白,**园子里大神指点,急,实在不知道怎么回事

......


细胞感染按照MOI吗?对照组呢?
举报 2017-05-03 14:34

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duocaihui

我转的是7901、7901/DDP两种细胞,前者7901细胞很容易就转上,并且转后,状态良好,可是7901/DDP一转就死,我用的是吉玛慢病毒,转24小时后换液,刚开始一两天,没有异常,但后来细胞慢慢就死了,并且不是漂浮的,很多是贴着壁死,像是瓦解了一样


这是未转时细胞的样子





这是细胞转后,死亡的样子


并且即使是有些细胞未死,细胞后来也变得很脏,感觉有很破碎的细胞碎片

本人实验小白,**园子里大神指点,急,实在不知道怎么回事

......


转染前细胞状态如何?第几次转染了?
举报 2017-05-03 21:14
转染前细胞的状态本身就要好,最好别用传代太久的细胞做实验,还有可能转染试剂本身毒性就很大,可以换换其他试试
举报 2017-05-11 11:50

状态不好的是顺铂耐药株吗

举报 2017-05-06 10:53

楼主,我转染si也遇到了相同的问题,只有边边上有少量活着的细胞,转染了好多次都是这样,请问你是怎么解决的?***分享解决方案

举报 2017-05-12 04:44
练医学生

转染前细胞状态如何?第几次转染了?

我也遇到了同样的问题,转染前细胞状态很好,转染24小时后换回完全培养基,细胞状态也很好,但是换液后第二天就开始大量由中心向四周围贴壁死,只有孔板周围还有零散的几个细胞还活着,求解呀

举报 2017-05-08 20:39

楼主呀,我也遇到相同的问题,转染前细胞状态很好,转染24小时后换回完全培养基,细胞状态也很好,但是换液后第二天就开始大量由中心向四周围贴壁死,只有孔板周围还有零散的几个细胞还活着,求解呀

举报 2017-05-12 22:14
狼牙gg

细胞感染按照MOI吗?对照组呢?

我在做慢病毒转染,把目的miRNA分别上调和下调,请问这两个(hU6-MCS-ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin和
Ubi-MCS-SV40-EGFP=IRSE-puromycin)阴性对照病毒是一样的吗?也就是过表达阴性对照和抑制表达阴性对照是不是都是一样的,那么我在做转染的时候是不是只做一组慢病毒阴性对照就行了,还是说过表达阴性对照和抑制表达阴性对照都要做?就是说我的分组是 1·空白组:细胞

2·过表达组:转染过表达慢病毒

3·过表达对照组:转染Ubi-MCS-SV40-EGFP=IRSE-puromycin

4·抑制表达组:转染抑制表达慢病毒

5·抑制表达对照组:转染hU6-MCS-ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin

还是说过表达对照和抑制表达对照这两组做其中的一组就可以了?

急需解答,谢谢!

举报 2017-05-03 13:53

楼主请问你的问题解决了吗?我也是做的SGC7901转染,用的lipo2000的脂质体。我的分组为未处理组,SIRNA下调组,和只加了lipo2000的组。我发现转染后第二题只加lipo2000的组的细胞大片死亡,反而下调组长得很好,请问你有没有遇到过这种问题呢?你转染前种六孔板每孔种的多少细胞,转染时每孔加多少lipo2000呢?这个问题困扰我很久了,导致下面的实验一直做不下去,希望做过的人可以不吝赐教,不甚感激!

举报 2017-05-04 03:29
是不是转染试剂和细胞不匹配?
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