求助：超声波破碎的技术资料...

求助：超声波破碎的技术资料

我做的时候,缓冲液一般为菌体的3倍,作用时间得看破碎效果如何.
破碎后的菌液状态是透明的.
你如果做60ml菌液的话,先离心再加入10-15ml的裂解液,然后放入50ml离心管中,注意固定后一定要在离心管外加一个带冰块的烧杯,进行冰浴,防止温度过高.

我做的是200ml菌液，离心后加了20ml缓冲液，超声波间隔破碎了近一个小时菌液都还是浑浊的，能不能告知是什么原因啊？谢谢先

我的条件是
100ml菌液离心，用8ml缓冲液悬浮，加8mg溶菌酶，冰浴30min，然后超声处理：
750W 40％功率
5秒超声，9秒间隔
超声至少90min。
超声完毕后，菌液应该是澄清的，略显油状。

怎么个澄清法？
是透明，还是液体是匀质的，不像超声前那么粘稠？
我今天10s 15s 30times，一共做了三次，
每次间隔5min

可以通过测A600处的光吸收判断是否破碎完全，光吸收值在下降，同时可以发现菌液变澄清。
我做过5%浓度的菌悬液，体积50ml ，用400W破碎半小时后光吸收值仍在下降，但目的蛋白已释放完全释放。

我大罐发酵大肠杆菌，一般150g湿菌加PBS悬浮到800到1000ml，1200W破菌150min，黏度下降，离心未见有白色菌体即可。

离心不见白色菌体是什么意思？那沉淀是什么样子的？全部是黑色吗？你是不是做包涵体？破菌150MIN是连续的吗？最后菌液的黏度怎么样？

我做的是20ml缓冲液/g菌体。条件是15s/15s 30周期。破碎后的菌液在外观形态上与破碎前没有太大差别，可能是我的菌浓度起初就不高的原因吧。不过我还真没有注意过澄清度的变化。可以做镜检看看破碎前后的 状况。发个图你看：
破碎前：

碎后：
版权所有，不得拷贝哦呵呵 :)

ecor
离心不见白色菌体是什么意思？那沉淀是什么样子的？全部是黑色吗？最后菌液的黏度怎么样？

中高速离心看沉淀多少自认为是最方便的检测超声破碎程度的方法（我一般用6,000 g 10 min, 比一般离心收集菌体的转速高一点）。 沉淀是未破碎或破碎不完全的菌体，它原来该是什么颜色还是什么颜色:) 黑色沉淀最可能是变性的蛋白！说明你的超声条件太剧烈了！菌液粘度是细菌染色体造成的，它被超声打断后菌液自然不粘了而且透清！