大肠杆菌怎么破碎最好呀？...

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大肠杆菌怎么破碎最好呀？

persistent

举报 2005-04-04 04:46

按1ml菌液×OD600加入100μl的比例加入2×上样缓冲液，混匀，-20℃保存或直接上样,一般上10ul就可以了
超声一般200w，10s，15s间隔，30次
1ml离心后重悬的菌液这样超30次即可，若是20ml超90次
你加溶菌酶后注意不要超声过头，否则菌液会炭化
你说的一片蓝是不是上样太多了？

westwin

举报 2005-04-03 00:29

一片蓝可能是超声过度，溶菌太厉害了，离心的时候没有离干净
最好先了解一下目标蛋白是周质还是胞质表达的，如果是周质，可以不用超声，用高渗就可以抽提。一般做超声的时候，要结合镜检结果来判断是否超声完全，可先做一个超声强度和次数的实验。

hxwyq

举报 2005-04-13 00:54

谢谢大家，我试着将超声时间缩短次数增加后，效果好的多了

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