【原创】taq酶表达的一些个人经验...

你电话多少，有事找你。

你好，我是做蛋白纯化这方面的，主要是Taq酶的表达诱导和纯化方面。在纯化taq酶时采用的是硫酸铵分级沉淀，目前遇到的问题是在第一次加入硫酸铵时，离心后，得不到完全澄清的溶液，有悬浮物，还有像油状的漂浮物在液面上，这一步很不好得到上清液，很消耗时间，而且多次离心和加大离心力都没得明显的效果的

希望你能帮我解决下这方面的问题 谢谢 !

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何军-hejun

你好，我是做蛋白纯化这方面的，主要是Taq酶的表达诱导和纯化方面。在纯化taq酶时采用的是硫酸铵分级沉淀，目前遇到的问题是在第一次加入硫酸铵时，离心后，得不到完全澄清的溶液，有悬浮物，还有像油状的漂浮物在液面上，这一步很不好得到上清液，很消耗时间，而且多次离心和加大离心力都没得明显的效果的

希望你能帮我解决下这方面的问题 谢谢 !

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我以前纯化Taq酶的时候，也有这种情况，是正常的，我是采用缩小离心量，以及离心后用移液枪吸取的办法。这步应该是要回收沉淀的啊，你怎么是要得到上清呢？

嗯，你好 ，谢谢老师的帮助

我们采用的是硫酸铵2步沉淀法，第一次加入硫酸铵是沉淀杂蛋白，离心得到上清液，然后加大硫酸铵的量，这一步的作用是沉淀目标蛋白。

我们是一次纯化量是8L的菌液量，最后得到的菌体用buffer A 重悬差不多就是800ml的溶液，如果采用缩小离心量是很麻烦的。我们也用枪头吸取溶液上漂浮的油状物，但是有些是吸不干净的。