如何选择二抗...

如何选择二抗

1 一抗的物种来源\x0d2 一抗是属于哪个类或亚类\x0d二抗需与一抗的类别或亚类相匹配.这通常是针对单克隆抗体而言.多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白,因此相应的二抗就是抗IgG抗体.\x0d单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品列表中列出,如果你的一抗是小鼠IgM,那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM,或是抗小鼠IgG抗体.\x0d如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3）,那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合,或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗,例如,如果你的一抗是小鼠IgG1,那么你可以选择抗IgG1的二抗,此种抗体在双标记实验中尤其适合.\x0d如果你不知道一抗是哪一类别或亚类,那么抗小鼠IgG是一个不错的选择,因为此种抗体可以识别大多数类型的IgG免疫球蛋白.\x0d下面总结了几种具有不同特异性的二抗：\x0d针对整个抗体分子（H＋L）具有特异性：如anti-IgG(H+L),此类抗体既可以与抗体的重链结合也可以与轻链结合,即与抗体分子的 Fc,F(ab’)2/Fab部分（见图5）均可反应,anti-IgG(H+L)也可以与其他免疫球蛋白家族反应（如IgM和IgA）,因为所有的免疫球蛋白都具有相同的轻链（?链或?链）.\x0d针对Fab片段具有特异性：这类抗体与重链轻链均可以结合,由于它们可以与轻链反应,它们同时也已和具有相同轻链的其他种类的免疫球蛋白反应.\x0d这对Fc片段或重链具有特异性：这类抗体和重链的Fc部分反应,一次它们是类别特异性的（即gamma链特异性抗体只与IgG反应,mu链特异性抗体只识别IgM,依此类推）.\x0d轻链（lambda,kappa）特异性：与所有类别的抗体反应,因为所有类别的抗体均具有相同的lambda链或kappa链.\x0d经过吸附处理的二抗：不同来源的免疫球蛋白含有相似的结构,抗一个物种的抗体可能与其他物种发生交叉反应,一次有些二抗经过了动物或人类IgG吸附处理,以减少非特异性背景.例如,如果是小鼠的组织或细胞,那么选择经小鼠血清或IgG吸附处理过的二抗可以减少非特异性结合.但是此种抗体识别表位的数量被大大减少.\x0d整个IgG分子：此种抗体适用于多数情况.\x0dF(ab’)2片段：该种抗体是由两个靠二硫键连接的用于结合抗原的Fab片段组成,这些抗体用在特定的情况中,如需要避免抗体与具有Fc受体的细胞结合的情况.\x0dFab片段：它们只有一个结合位点,一般用来封闭内源性免疫球蛋白.\x0d一般来讲,耦联到二抗上的探针主要有酶（辣根过氧化酶HRP和碱性磷酸酶AP或其衍生物APAAP,PAP）,荧光基团（FITC,RRX,TR,PE）和生物素.选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验.对于western blot和ELISA,最常用的二抗是酶标二抗,而细胞或组织标记实验（细胞免疫化学,组织免疫化学,流式细胞术）中通常使用荧光基团标记的二抗,免疫组化中也可以使用辣根过氧化酶或碱性磷酸酶标记的二抗.如果想要更大程度的放大检测信号,可以使用biotin/avidin检测系统.5 抗体的纯度：展开