二抗IgG能检测它的亚型吗...

二抗IgG能检测它的亚型吗

如何选择正确的二抗？
以下指南将帮助您选择最适合该应用的二抗。
1. 一抗的宿主物种是什么？二抗指向一抗的物种。如果使用来源于兔的一抗，则需要来源于除兔以外的其它物种的抗兔二抗。例如山羊多克隆抗兔IgG - H L （HRP） 二抗 可以检测兔多克隆抗 Ki67 一抗 。
2. 需要了解哪些有关一抗同型的内容？二抗必须指向一抗同型。
多克隆一抗通常来源于兔、山羊、绵羊或驴，并且是IgG 同型。二抗通常为抗 IgG 重链和轻链的抗体。
单克隆一抗通常来源于小鼠、兔和大鼠。例如，如果单克隆一抗为小鼠 IgG1，则 需要抗小鼠 IgG 或特异性较低的 F（ab） 片段抗小鼠 IgG。
人免疫球蛋白类、亚类、型和亚型：
类或同型：IgG （ heavy chains）, IgM （ ）, IgA （ ）, IgE （ε）, IgD （ ）
亚类： IgG1 （ 1 heavy chains）, IgG2 （ 2）, IgG3 （ 3）, IgG4 （ 4）; IgA1 （ 1）, IgA2 （ 2）
型： light chain, light chain
亚型： 1, 2, 3, 4
其它类型的反应：
多价抗体与所有免疫球蛋白类反应
抗 Fc 或重链 （ , , ε, , and ） 抗体仅与重链反应
抗 F（ab） 或完整分子抗体与重链和轻链反应，而与免疫球蛋白类无关。
由于所有免疫球蛋白类均使用相同的 和 轻链，因此抗轻链（ 和 ）抗体 与所有免疫球蛋白类反应
3. 需要酶学或荧光检测吗？偶联类型是依赖于应用的。
对于酶学和生物素检测，例如，在 WB 或 ELISA 中，建议将二抗偶联于 HR[工业电器网-cnelc]P, AP 或 生物素。不论抗体宿主物种是什麽，抗生物素蛋白和链霉亲和素与生物素的结合 作用均很强，并且均能使信号放大。
如果使用了激光，例如，在流式细胞术、ICC/IF 或 IHC 中使用时，则建议将二抗偶 联于荧光染料进行荧光检测。访问我们 荧光染料指南，为您的实验选择染料。
4. 是否需要预吸附的二抗？对于富含免疫球蛋白的组织和细胞，通常推荐使用预吸附血清的二抗于蛋白质印 迹应用。预吸附的二抗与内源免疫球蛋白发生相互作用的可能性较低，因此可降 低非特异性背景。二抗进行预吸附时，预吸附样品应来源于与检测样品相同的物 种。例如，在人组织中检测时，将需要人预吸附抗体。
5. 是否需要亲和纯化的抗体或 IgG 片段？使用亲和纯化的抗体或 IgG 片段的优点将取决于预期的结合类型。亲和纯化的抗 体的非特异性结合量最低，而 IgG 片段包含高亲和抗体。事实上，在亲和纯化中， 高亲和力抗体保持固定在基质上并且不能被洗脱。
6.有必要使用 F（ab） 或 F（ab）2片段抗体吗？F（ab） ） 和 F（ab）2片段抗体消除了抗体 Fc 部分与细胞（如巨噬细胞、树突细胞、 中性粒细胞、NK 细胞和 B 细胞）上 Fc 受体之间的非特异性结合，并且由于它 们尺寸较小而能够更有效地渗透组织。由于片段抗体不具有 Fc 部分，因此它们 不干扰抗 Fc 介导的抗体检测。
查看使用 F（ab） 或 F（ab）2 片段抗体的优点
7. 是否需要抗 IgG 重链和轻链、抗轻链或抗 F（ab）2 二抗？我们以不同形式提供二抗：
抗 IgG 重链和轻链的抗体同时与 IgG 亚类的重链和轻链反应
抗轻链抗体与在所有免疫球蛋白类中均相同的一抗轻链反应
抗 F（ab）2 二抗与一抗的 F（ab）2 部分反应.