cDNA文库构建问题...

cDNA文库构建问题

自问自答：
Standard cDNA Libraries Libraries containing ≥1kb average insert size
Large Insert cDNA Libraries Containing ≥3kb average insert size
Microquantity cDNA Libraries From small amounts of tissue (mg) or RNA (ng)
Nanoquantity cDNA Libraries From very small amounts of tissue (礸), cells (25,000) or RNA (ng)
Library Normalization Services Process by which the cDNA copies of a primary library are equalized
Library Subtraction Services Powerful method by which the genes in common between normal and disease tissue libraries are reduced to near zero 。

我只做过下边两种，不知Large insert cDNA Libraries 有什么技术要点
Normalized cDNA Libraries
Subtracted cDNA Libraries

技术要点我也不知道阿，55555
Standard
Starting Material：Total RNA (≥1mg)
Cells (≥1.0 x1 08)
Tissue (≥1g)
Primary Clones ：2 x 107
Avg. Insert Size： >1kb
% Recombinants ：>95%

Large Insert
Starting Material ：Total RNA (≥2mg)
Cells (≥2.0 x 108)
Tissue (≥2g)
Primary Clones：1 x 107
% Recombinants ：>3kb
Avg. Insert Size：>95%

invitrogen说自己的CloneMiner™ cDNA 文库构建试剂盒（The CloneMiner™ cDNA Library Construction Kit）能够构建高代表性cDNA文库，是顶尖的cDNA文库构建！！（不知道大家有没有什么意见？？）

* SuperScript™ II 逆转录技术提供非常高百分比的全长cDNA。SuperScript™ II 逆转录酶（RT）减少RNase H活性，大大地降低了第一链合成时RNA的降解。
* Gateway®技术，出色的位点重组系统，介导了实际的文库构建，允许您在不同的载体间转移目的cDNA片段，保持方向和阅读框，有效地替代了限制酶和连接酶的使用。

展开引用

chhualong
技术要点我也不知道阿，55555
Standard
Starting Material：Total RNA (≥1mg)
Cells (≥1.0 x1 08)
Tissue (≥1g)
Primary Clones ：2 x 107
Avg. Insert Size： >1kb
% Recombinants ：>95%

Large Insert
Starting Material ：Total RNA (≥2mg)
Cells (≥2.0 x 108)
Tissue (≥2g)
Primary Clones：1 x 107
% Recombinants ：>3kb
Avg. Insert Size：>95%

......

Total RNA 的量这么大？我用clontech smart 试剂盒只需1-2ug，而且可以直接用总RNA。请教这样建出的文库属那类？

xib99
Total RNA 的量这么大？我用clontech smart 试剂盒只需1-2ug，而且可以直接用总RNA。请教这样建出的文库属那类？

[iframe]http://www.agencourt.com/services/cdna_library/[/iframe]

唉，什么也没看到！

xib99
唉，什么也没看到！

http://www.agencourt.com/services/cdna_library/

基本上没有区别，都差不多的，如果用试剂盒做，没有这么多区别的，一般用SMART方法得到的长度都不长的，可以找公司做做看，我觉得比自己做的好些，可能自己的技术水平有限吧。比如上海海科生物等。