收藏  |   举报 2005-06-09 12:34   关注:202   回答:3

【求助】关于RNA干扰载体构建的连接反应?...

已解决 悬赏分:0 - 解决时间 2024-12-24 11:49
【求助】关于RNA干扰载体构建的连接反应?
举报 2005-06-12 18:30
你应该平行地做2个对照,空白对照和阳性对照(一般公司试剂盒会提供一个对照)。不要总怀疑转化问题,问题很大程度上是在连接上。如果连阳性对照都出不来,就得考虑考虑你的连接体系。RNA1的oligo的退火是比一般的双链退火要复杂一点,应采取慢退火的方法。你可以将oligo混合物放在PCR仪上,PCR仪升到94度后,关闭PCR仪,然后让PCR仪自然降到室温就可以了。
举报 2005-06-15 06:44
你应该平行地做2个对照,空白对照和阳性对照(一般公司试剂盒会提供一个对照)。不要总怀疑转化问题,问题很大程度上是在连接上。如果连阳性对照都出不来,就得考虑考虑你的连接体系。RNA1的oligo的退火是比一般的双链退火要复杂一点,应采取慢退火的方法。你可以将oligo混合物放在PCR仪上,PCR仪升到94度后,关闭PCR仪,然后让PCR仪自然降到室温就可以了。
举报 2005-06-18 03:30
谢谢!我有个很幼稚的问题想请教,我所购买的质粒载体中有个阳性对照的质粒,这个质粒该怎么使用呢?
另外,是不是和我的连接反应温度有关系?根据RNAi相关的文献报道中都是4°放置>16小时,但是其他方面的文献中关于载体构建的连接大多都是16°放置16小时。
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