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2017-05-29 15:42
转染后28-48小时才能进行进行qRT-PCR检测，转染后48-72小时才能进行蛋白检测。实验时最好要设置好阳性对照，FAM标记的荧光对照可以观察转染效率，GAPDH等阳性对照组可排除实验操作的影响的，如果没有验证有效的靶序列，最好多设计几条，我是买的Transheep 的4＋3 siRNA 套装，筛选后有2个靶点有效，之前做一个target的时候审稿人会问脱靶的问题，2个target同时做，啥也不说了，转染效率也很重要，如果转染效率是70，靶点的干扰效率就算有80，最后体现的实际效率只有56，siRNA转染需要用专门的转染试剂，lipo2000做实验效果不是很好，毒性大，如果遇到难转的细胞，效率也很低，现在有纳米材料的转染试剂非常好用，比如我购买Transheep 他们赠送的 Namipo，纳米泡转染试剂，相对于之前用的好太多，细胞生长的状态完全没有收到转染的影响，几乎没飘什么细胞，上个我转染的效果图，这个是用纳米泡转染的siRNA-fam，细胞是RAW264.7 |
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