怎样根据sirna确定其特异性...

怎样根据sirna确定其特异性

1，mRNA 水平的检测：siRNA 的作用机理在于其引起靶 mRNA 的降解，因此 mRNA 的降解水平是 siRNA 沉默效率的最直接指标。一般在 siRNA 转染后 24~72h 即可以检测到靶 mRNA 水平的降低。检测方法一般采用 Real-time PCR 定量检测。2，蛋白水平的检测：一般需要借助抗体(针对靶基因蛋白质的抗体或针对融合蛋白的抗体)或报告基因系统检测，检测手段一般有 Western-blot、免疫组化等。一般说来，检测时间受细胞内蛋白质表达量、蛋白质本身的半衰期等因素的影响，一般为 48~96h，甚至更长时间之后多点采样。3，通过siRNA引起的其他生物学变化来检测：某些siRNA作用于靶基因，会引起细胞的调亡和增殖变化，这个时候，可以通过关于调亡和增殖的变化来看RNAi的效果。希望能对您的问题有所帮助。