|
举报
2017-10-09 08:25
全血基因组DNA提取试剂盒（吸附柱法）本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取全血基因组DNA。 离心吸附柱中采用的硅基质材料，能够高效、专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。 提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用全血基因组DNA提取试剂盒（吸附柱法）提取的基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、 PCR、文库构建、Southern杂交等实验。操作步骤：使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机
在室温下离心。样品的处理(本产品适用于处理新鲜的或已经添加抗凝剂的 0.lml-1ml 血液样品)： a、在血液样品中加入 2-3 倍体积的红细胞裂解液，充分颠倒混匀，12000rpm 离心 1min，小心吸去上清，沉淀 应为白色或淡红色，如果裂解不彻底，可重复以上述步骤一次。向沉淀中加 200ul 溶液 YA，振荡至彻底混匀。 b、 如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量为 5-20u1， 不需要再用红细胞裂解液处理，直接加 200ul 溶液 YA，振荡至彻底混匀。向悬浮液中加入 20ul 的 RNase A (10mg/ml)，充分颠倒混匀，室温放置 10min。加入 20ul 的蛋白酶 K( 10mg /ml )，充分颠倒混匀，65℃水浴消化 30-60min，消化期间可颠倒离心管混匀数 次，直至样品消化完全为止。加入 200ul 溶液 YB，再加入 200ul 无水乙醇，充分颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响 DNA 的提 取，可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中，室温放置 2min。12000rpm 离心 2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸 附柱放入收集管中。向吸附柱中加入 600ul 漂洗液，12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。12000rpm 离心 2min，将吸附柱敞口置于室温或 50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除， 否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR 等。将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul 经 65℃水浴预热的洗脱液，室温放置 5min，12000rpm 离心 1min。离心所得洗脱液可再加入吸附柱中，12000rpm 离心 2min，即可得到高质量的基因组 DNA。注意事项:本试剂盒置于室温( 15 -25℃) 干燥条件下可保存12个月，更长时间的保存可置于2 -8℃。常用的血液抗凝剂有EDTA、ACD和肝素等，需注意的是，如欲制备大分子量血液基因组DNA，可优先考虑 使用ACD抗凝。一般不使用肝素抗凝，因为用肝素抗凝的血液提取的基因组DNA进行PCR扩增时，有PCR扩增 抑制现象。样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。如果试剂盒中的溶液出现沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响效果。绝大多数哺乳动物全血中的红细胞无核，故在提取基因组DNA时需去除不含DNA的无核红细胞，以免影响 白细胞裂解和DNA释放。如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液，其红细胞为有核细胞， 因此处理量减少为5-20ul，不需要再用红细胞裂解液来裂解红细胞。洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul，体积过小会影响回收效率:洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响；若需要 用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)，pH 值低于7.0会降低洗脱效率。 |
已解决
