【求助】用QuikChange试剂盒做单点突变，测序后没有突...

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悬赏分：0 - 解决时间 2024-11-23 19:07

【求助】用QuikChange试剂盒做单点突变，测序后没有突变

举报 2013-04-09 10:46

GC含量高，体系里加4%-8%的DMSO

延伸时间尽可能缩短，最多16-20个循环。PCR后DpnI消化一小时后震荡混匀，离心后再消化一小时

如果实在有困难，连T载体应该会容易很多

举报 2013-04-17 22:03

laforet
GC含量高，体系里加4%-8%的DMSO

延伸时间尽可能缩短，最多16-20个循环。PCR后DpnI消化一小时后震荡混匀，离心后再消化一小时

如果实在有困难，连T载体应该会容易很多

好的，谢谢前辈啦，我先试试看加DMSO，再把片段切到t载体上试试~~

举报 2013-04-20 08:00

请问，实验结果怎么样了？？？我也在用这种方法，测序显示都没有突变，求指教？？

举报 2013-04-13 16:38

yunlongma
请问，实验结果怎么样了？？？我也在用这种方法，测序显示都没有突变，求指教？？

我用了小一些的质粒就做出来了····
如果还是做不出来那就修改一下反应时间温度循环的条件。
这个试剂盒比较贵，所以在摸条件的时候不用按照说明书上的体积，只要比例对就行！

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