【求助】有人用过pcDNA3.1 TA TOPO克隆试剂盒吗...

【求助】有人用过pcDNA3.1 TA TOPO克隆试剂盒吗?

可以
这个试剂盒是INVITROGEN公司的
需要ＰＣＲ的酶能产生Ａ末端，然后按说明书进行操作即可，和一般ＴＡ克隆载体使用无太大差别，
但是此克隆连接为ＴＯＰＯ连接，不需ligase

非常感谢你的热心帮助。我还想问你一个问题。
用这个TOPO克隆试剂盒联入的PCR产物还用鉴定方向吗？
如果需要鉴定方向，该用什么方法？
pcDNA3.1 Directional TOPO克隆你用过吗？这个对PCR产物的要求是什么，是不是应该加酶切位点而不是加A

实际上就像一个Ｔ载体了，只不过这个东西既可以克隆也可以表达

pcDNA3.1 Directional TOPO克隆和pcDNA3.1/V5-His TOPO TA 克隆试剂盒对PCR产物的要求是不是不一样啊?前者是要求在上游引物加上CACC进行PCR扩增,连接成功后不需要鉴定方向;而后者只要在PCR产物加A末端即可,连接后要鉴定方向.我的理解是这样的,不知道是否正确,请指正!

但是我有一个问题，连入PCDNA3.1的片断一般都是较大的片断，但是TOPO又是TA克隆，而高保真酶一般都不加A的，怎么来解决既可以扩增长片断，又保真，并且还加A？（Takara的LA证明保真性是不行的）

对于pcDNA3.1 TA TOPO克隆方法好像讨论得比较少哦，上传一个pcDNA3.1 TA TOPO克隆试剂盒说明书，看看有帮助么？

pcdna3.1topota_man.pdf(291.82k)