【求助】EV71感染性cDNA克隆的构建...

【求助】EV71感染性cDNA克隆的构建

斑马鱼和爪蟾中可以用pCS2+，promega宣称pGEM-T也可以做体外转录的

1、PCR扩增带有T7启动子序列的全长片段也是可以用来做体外转录的，但是如果把这个片段构建到载体上得到质粒以后有利于对病毒基因进行改造。体外转录对模板的量的有一定的要求，但我觉得对其质量的要求更为重要。而且是做感染性克隆的话那就要连到载体上最后成功包装出病毒来了才叫感染性克隆吧。
2、5’端和3’端冗余序列的存在我觉得是会有一定影响的。
不知道楼主这个感染性克隆目前进展如何，我们可以交流交流。

我也想要做感染性cDNA克隆的构建，你现在做得怎么样，能不能说一说你的经验呢？谢谢啦

提取的RNA好像质量不高

你rna提取的质量不好应该是你是宴不成功的主要原因
你可以用其他引物，比如内参什么的用来扩下，可以检验下自己模板质量

忘了说声，我RNA和PCR 是从下向上跑的。