【原创】腺病毒基因克隆，细菌电转吃大亏...

【原创】腺病毒基因克隆，细菌电转吃大亏

电转时是要尽量避免带进去离子的，否则商家也不用把化学转化和电转化的感受态细胞分开出售了，呵呵！至于DH5a肯定是不行的，我想最根本的原因应该是其中不含有重组酶，这样你就是做一年也不会发生重组的。其实做分子生物学实验一定要对原理清楚。你的经验教训确实可以避免新手犯错误。呵呵！

还有一个问题就是我用PacI 处理重组腺病毒质粒时得到的片段基本上都是4.5kb，3kb片段的几率小于15%。难不成都是在ori位点发生同源重组的？

事实就是如此，绝大部分都是左、右臂重组，切下来的小片段是4.5kb；只有不到10%的是复制起始点与右臂的重组，切下来的小片段是3kb。

请看我的图，BamHI消化重组病毒质粒pEasy-1/gene。左1到左4均为阳性病毒重组克隆，以前鉴定过:PacI 可切出4.5 kb片段；PCR结果亦表明有目的基因插入。左5和左6为对照质粒pAdTrack-CMV 和pAdEasy-1的BamHI 消化结果。我的问题是：
1）转染293 cells后有荧光没病毒。用转染10d后的细胞裂解物无法感染新的293细胞。
2）从图上看，BamHI消化后的阳性病毒重组质粒（左1到左4)怎么比对照质粒pAdEasy-1(左5)还小？两条带都小于对照...

如今又商品化的腺病毒backbone质粒pAdEasy-1已转化至BJ5183 Ecoli菌株中，只是有点小贵而已！！

请问这样的慢病毒和逆转录病毒的使用时不是很严格啊？普通的实验室怕是不能做吧？

学习了。。。

。。。。。。电转的秘诀是离子越少越好，楼主该多看看基础的东西，磨刀不误砍柴功。

完全是超级菜鸟嘛……

"完全是超级菜鸟嘛……"
别吹了！