【求助】放射受体分析和液闪仪使用问题...

【求助】放射受体分析和液闪仪使用问题

这样做 不是很好
1 binding assay做起来不那么容易，实验中最关键的是放射性配体的浓度和 蛋白浓度的比例，他决定了你所得到的数据有无剂量依赖性，需要你做预实验，每次每个剂量要做三副管，之后取均值。
2 30度反应一个小时后，最好还是负压抽滤，之后烘干滤纸，放闪烁液，再计数。
3 你用离心的方法，我没有做过，但给我感觉误差要大，可重复性不是很高。但可以做几次预实验看看。
4 加入闪烁液后可以直接计数，如果数据不稳定，可以放置一段时间再测，我试过，一般数据差距不会很大。
5 我做的是转染后的细胞提取蛋白，蛋白浓度20ug/反应体系，反应体系100ul，同位素10000dpm（相当于1nM)
实验中要注意的事项，如果测得的数值偏高，而且没有梯度，通常都是蛋白浓度过高，同位素的浓度不够。