【求助】超声破碎仪提取总RNA和基因组DNA...

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【求助】超声破碎仪提取总RNA和基因组DNA

举报 2010-09-15 21:58

顶起！盼高人解答。谢谢！

举报 2010-09-19 04:45

能！我和同学提取肝脏组织的蛋白和RNA都是用的超声细胞破碎仪，注意放在冰上操作，组织粉碎即可，具体电压不记得了。
用酒精棉球擦拭，再用无菌棉片檫干消毒后，再放入trizol中超声破碎，然后按提取步骤操作就行了。
提取出来的RNA沉淀还是很多的，后续的结果也可以，可以试试。

举报 2010-09-21 00:12

请问电压和时间？

举报 2010-09-25 19:43

不推荐使用，确实存在问题
1：会把RNA和DNA打断。2：超声破碎过程中会产热，会降解RNA。
如果构建cDNA文库一定不要使用，但是普通的rt可以使用
肝脏的酶活性很强，推荐使用液氮研磨

举报 2010-09-19 07:48

谢谢楼上各位的回复！

举报 2010-09-21 19:19

也没有什么电压和时间吧，那个东西，打的时间长一点点，头就特别的热，所以一般都是在磨的过程中备一瓶带冰的NS，一般都是十五秒一停，然后就放入带冰的NS中降一下温，电压好像总有两三档来着，能打碎就OK。如果是DNA还行，RNA还是像楼上推荐的液氮研磨。

举报 2010-09-19 13:47

songtion
不推荐使用，确实存在问题
1：会把RNA和DNA打断。2：超声破碎过程中会产热，会降解RNA。
如果构建cDNA文库一定不要使用，但是普通的rt可以使用
肝脏的酶活性很强，推荐使用液氮研磨

如果是培养的肝细胞可以用液氮研磨吗，因为加trizol之后感觉裂解不完全，如果加了trizol怎么用液氮研磨呢？

举报 2010-09-17 21:53

我用超声破碎血块最后pcrp出来了

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