怎样防止elisa洗板时孔间污染...

怎样防止elisa洗板时孔间污染

在做ELISA实验时，洗板有两种方法：手工法洗板和洗板机洗板。二者没有本质的差别,只要操作合乎要求,均能得到正确、可靠的结果。手工洗板是每次反应温育后,将反应液吸出或甩干,然后在板孔中加满洗液,放置2～3 min后,将洗液吸出或甩干再在吸水纸上拍干。重复上述洗涤步骤3～4次,最后在吸水纸上拍干即可。手工洗板人为因素比较大,实验人员必须经验丰富,洗涤次数要足够,冲击力又不要太大,加入的洗液量以刚满反应孔为限,防止孔口内有游离酶未能洗净,同时防止孔与孔之间液体交叉。洗涤结束后扣干亦非常重要,否则易造成假阳性。每次洗完板后,在吸水纸上轻轻拍干,拍板时要垂直,避免交叉感染。用力不能过猛,防止抗原抗体复合物脱离;吸水纸要一次性使用,应使用不易脱落碎屑的吸水纸为宜。酶结合物不耐干燥,特别在较高的温度下更易失活,所以拍干的反应板应尽量缩短在空气中暴露的时间,时间越长,吸光度值越低。洗板机洗板是将手工操作改由洗板机进行,人为因素少,速度快,条件恒定,但是使用洗板机洗板的一个特点是,每次洗板后不能拍干,故有较多的液体残留,需增加洗板次数来减少这种误差。洗板机洗板次数越少,假阳性越高,本实验中,洗板1次,假阳性率高达90%;洗板2次,假阳性率为38%;洗板3次,假阳性率为2%;洗板4～5次,未出现假阳性。洗板次数并非越多越好,太多不但浪费人力、物力,并且也会导致假阴性结果,所以一般试剂盒要求洗板4～5次即可。洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅,若被杂物堵塞时可用注射器针头挑出。为了洗涤效果较好,实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法,在机器洗涤后再进行人工洗板1～2次,能达到理想的洗涤效果。