收藏  |   举报 2004-07-21 11:21   关注:283   回答:24

冻干的蛋白怎样才能溶解在上样buffer里??-急!!...

已解决 悬赏分:0 - 解决时间 2024-12-24 11:48
冻干的蛋白怎样才能溶解在上样buffer里??-急!!
举报 2004-07-26 08:38
我检索了,很多有关丙酮沉淀的,可是没有找到如何能溶解。战友们,快帮忙啊!偶都溶了一个中午了,现在也没有溶解!!
举报 2004-07-31 08:35
用裂解液也溶不掉?
举报 2004-07-23 01:35
是啊!我用丙酮沉淀,-20过夜后,离心,再用丙酮洗了两遍,洗的时候就觉得沉淀很难吹打开,洗完后我就将EP管开着盖放-20冰箱,第二天发现冻干了,白色粉末状,将其用1×SDS上样缓冲液溶,我个人觉得一点也没有溶,我敲打了一个中午,最后将EP管放在沸水里放了5分钟,感觉好像溶了一点点,就凑合着上样了,电泳的结果是,什么带也没有!快帮忙啊!
举报 2004-07-25 09:54
啊?
你就直接将冻成干粉的蛋白溶解到1×SDS上样缓冲溶液中?
当然很难溶解.而且蛋白的浓度也很高.蛋白溶解需要高浓度的尿素.
你可以将冻成干粉的蛋白再用裂解液裂解,然后再加1×SDS上样缓冲溶液,再上样.
举报 2004-07-24 10:08
尿素?裂解液裂解?可是1×SDS上样缓冲溶液不也可以当裂解液使用吗?一些实验室的裂解液就是1×SDS上样缓冲溶液,什么时候加尿素呢??
举报 2004-07-31 10:46
可是你的蛋白很难溶解啊
你用裂解液试试,应该没问题
举报 2004-07-29 07:58
用裂解液溶解后是不是应该加2×或2×以上的上样buffer啊?
举报 2004-07-30 04:02
可以放在超声波清洗机超声一会,不过注意会变性的奥
举报 2004-07-29 20:19
claybird
我检索了,很多有关丙酮沉淀的,可是没有找到如何能溶解。战友们,快帮忙啊!偶都溶了一个中午了,现在也没有溶解!!


这是老问题。我也困扰了好久。没发现园子里有好的解决办法。
加很猛的裂解液只能溶解一部分的。
超声倒没试过。
举报 2004-07-28 12:14
华辰多肽
可以放在超声波清洗机超声一会,不过注意会变性的奥

偶知道细胞超声仪不会使蛋白变性,用这超超行不行?
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