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2014-10-16 09:57
个人建议时间不要再长了,再长蛋白有可能变性造成后续实验无法进行。我原来遇到这类问题是用以下几种方法尝试解决的,你也可以尝试一下(1)检查一下你的三明治结构夹的怎么样,尤其是膜及滤纸的边缘是不是有短接的地方,这个是最容易出现的问题。另外膜和胶之间是不是有气泡,不推荐用外力去擀压膜和胶,推荐用缓冲液润湿膜和胶之后,像做切片盖盖玻片一样从一边盖下赶出气体。要绝对确保没有短接和气泡,不然很容易出现转膜不完全的问题。(2)换成恒压的试试,这个方案我不知道原理是什么,但是有的时候确实能够解决问题。(3)换成半干转的方法,但是注意半干转更要确保没有短接气泡,而且时间不能过长,半干转的发热量很大。我不清楚你的蛋白是不是需要活性,如果遇热失活那就不能用这种方法。(4)这个方法比较浪费,看老板让不让你用了。换成品缓冲液商品,西格玛的比较好。另外换24层滤纸成品,用一次不要再使用第二次。还有就是还一个牌子的膜,我们实验室曾经遇到过一个牌子的膜完全转不出来的现象。以上,希望你的问题早日能够解决。
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2014-10-17 11:39
完了,只用过湿转做mTOR,分子量太大了!
湿转条件:350mA,75min |