收藏  |   举报 2017-06-01 10:38   关注:208   回答:9

求助!!!第一次做琼脂糖凝胶电泳...

已解决 悬赏分:0 - 解决时间 2024-11-27 16:39
求助!!!第一次做琼脂糖凝胶电泳
举报 2017-06-09 17:36
微光ksm
我用试剂盒提了质粒,想跑琼脂糖凝胶电泳看看质粒的纯度如何,结果Marker很清晰,但是样本一点条带都没有,孔的位置也不亮,做了两次,也加大了上样量,都没有出现条带,求朋友们指点!!!

测浓度了吗?
举报 2017-06-07 23:05
sicaujj

测浓度了吗?

测了,浓度不高,60纳克/微升左右
举报 2017-06-09 05:24
微光ksm

测了,浓度不高,60纳克/微升左右

这个kit提出来是用于测序的吗?浓度太低了,你要想看到条带,至少要上个5ul吧。
举报 2017-06-12 02:20
sicaujj

这个kit提出来是用于测序的吗?浓度太低了,你要想看到条带,至少要上个5ul吧。

我用的是10*loading buffer,样本加了9微升
举报 2017-06-11 01:16

1. 制胶 以制备50ml, 1%凝胶为例,按压取1片低渗琼脂糖,放入50ml缓冲液浸泡203分钟使之完全崩解,之后操作与粉末琼脂糖相同。(注意,不需添加任何染料。)

2.染色 GelRed Loading Buffer与样品按照1:4体积比混合放置3-5分钟。

3. 上样 样品与Marker按常规方法上样。

4. 电泳、成像分析同常规做法。

您可关注公司网址:www.life-ilab.com

举报 2017-06-10 01:03
sicaujj

这个kit提出来是用于测序的吗?浓度太低了,你要想看到条带,至少要上个5ul吧。

又提了一次浓度在160多,A260峰明显,上样量9μl,还是没有条带,真的不知道哪里出了问题,高手能帮忙分析一下吗
举报 2017-06-12 23:51

展开引用

微光ksm

又提了一次浓度在160多,A260峰明显,上样量9μl,还是没有条带,真的不知道哪里出了问题,高手能帮忙分析一下吗

......


做转化后板上的菌长的正常吗?用的什么感受态?什么载体?用的什么kit提质粒的?
举报 2017-06-09 09:04
sicaujj

做转化后板上的菌长的正常吗?用的什么感受态?什么载体?用的什么kit提质粒的?

这个是空白质粒,别人给的菌种,是15年的,摇过夜后用康维世纪小提试剂盒提的,给的人说这次的不是很好,但还是可以跑出条带的
举报 2017-06-02 16:35
微光ksm

这个是空白质粒,别人给的菌种,是15年的,摇过夜后用康维世纪小提试剂盒提的,给的人说这次的不是很好,但还是可以跑出条带的

过夜培养后离心下来的菌量也很少咯?要不划线活化一下。要么把你现在的质粒拿去换一种感受态快转看看。
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